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第1节 DNA重组技术的基本工具
【本节重难点】
重点:DNA重组技术所需的三种基本工具的作用
难点:基因工程载体所需要具备的条件
【知识精讲】
教材梳理
知识点一 基因工程的概念:基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫做DNA重组技术。
注意:对本概念应从以下几个方面理解:
操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物
知识点二 基因工程的基本工具
1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
(1)限制性内切酶的来源:主要是从原核生物中分离纯化来的。
(2)限制性内切酶的功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。
(3)限制性内切酶的切割方式:①在中心轴线两侧将DNA切开,切口是黏性末端。②沿着中心轴线切开DNA,切口是平末端。
注意:比较有关的DNA酶
(1)DNA水解酶:能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸,彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基
(2)DNA解旋酶:能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链,作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。注意:使DNA解成两条长链的方法除用解旋酶以外,在适当的高温(如94℃)、重金属盐的作用下,也可使DNA解旋。
(3)DNA聚合酶:能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链。
(4)DNA连接酶:是通过磷酸二酯键连接双链DNA的缺口。注意比较DNA聚合酶和DNA连接酶的异同点。
2.DNA连接酶——“分子缝合针”
(1)DNA连接酶的分类:E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。
(2)作用及作用部位:E.coliDNA连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二酯键,T4DNA连接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。
3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
(1)分子运载车的分类:①质粒:常存在于原核细胞和酵母菌中,是一种分子质量较小的环状的裸露的DNA分子,独立于拟核之外。②病毒:常用的病毒有噬菌体、动植物病毒等。
(2)运载体使用的目的:①是用它做运载工具,将目的基因转运到宿主细胞中去。②是利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。
(3)作为运载体必须具备的条件:①在宿主细胞中保存下来并大量复制 ②有多个限制性内切酶切点 ③有一定的标志基因,便于筛选。
思维探究:知识点3、4、5主要是介绍DNA重组技术的三种基本工具及其作用。限制酶──“分子手术刀”,主要是介绍限制酶的作用,切割后产生的结果。在这部分内容学习时,应关心的问题之一是:限制酶从哪里寻找?我们可以联想从前学过的内容──噬菌体侵染细菌的实验,进而认识细菌等单细胞生物容易受到自然界外源DNA的入侵。那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭,有何保护机制?进而联想到可能是有什么酶来切割外源DNA,而使之失效,达到保护自身的目的”。这样就对“限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来”的认识提高了一个层次。
DNA连接酶──DNA片段的“分子缝合针”,在这里同学们很容易想到碱基互补配对或DNA聚合酶,这是很自然的。但只考虑到碱基互补配对原则还是不够的,我们可以从原有的知识出发,要想到限制酶切开的DNA中膦酸与脱氧核糖之间的磷酸二酯键,这个地方还没有连接起来,又是怎样连接的呢?这样自然而然地想到DNA连接酶。
基因进入受体细胞的载体──“分子运输车”的学习内容,不能仅仅着眼于记住这几个条件,而应该深入思考每一个条件的内涵,通过深思熟虑,才能真正明确为什么要有这些条件才能充当载体。
教材拓展
拓展点一 限制酶所识别序列的特点
限制酶所识别的序列的特点是:呈现碱基互补对称,无论是奇数个碱基还是偶数个碱基,都可以找到一条中心轴线,如图,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。如: 以中心线为轴,两侧碱基互补对称; 以 为轴,两侧碱基互补对称。
拓展点二 DNA连接酶连接的是什么部位?
DNA连接酶是将一段DNA片段3′端的羟基与另一DNA片段5′端磷酸基团上的羟基连接起来形成酯键,而不是连接互补碱基之间的氢键。
【典题分类精析】
考点一、基因工程的概念
例1.(2005高考广东)以下有关基因工程的叙述,正确的是 ( )
A、基因工程是细胞水平上的生物工程 B、基因工程的产物对人类都是有益的
C、基因工程产生的变异属于人工诱变 D、基因工程育种的优点之一是目的性强
分析:本题考查的知识点是基因工程的概念。解答本题的关键
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