5-3-2Q-PCR绪论.pptVIP

* 2 主要核酸操作技术 核酸凝胶电泳技术 核酸分离 PCR技术 突变位点的检测 DNA/cDNA文库的构建 基因克隆技术 实时定量PCR (Real time Quantitative PCR) Molecular Biology Course 主 要 内 容 实时定量PCR原理 实时定量PCR的几种方法介绍 Molecular Biology Course 实时定量PCR原理 ---常规PCR 常规PCR技术： PCR后借助电泳对扩增反应的终产物进行定量及定性分析 DNA Engine S1 S2 M 只能对终产物进行分析,无法对起始模板准确定量 实时定量PCR 原理 ------实时原理 实时定量PCR技术(Real time Quantitative PCR，Q-PCR) ： 荧光探针事先混合在PCR反应液中，在反应过程中，荧光探针与大片段DNA结合后，被激发出荧光。 对PCR扩增反应中每一个循环的反应产物实时进行定量和定性分析，基本消除了在测定终端产物时较大的变异系数。 一小段单链DNA或者RNA片段（大约是20到500bp），用于检测与其互补的核酸序列 实时荧光定量PCR 原理 ----------- 扩增曲线 扩增曲线图： 横坐标：扩增循环数（Cycle）；纵坐标：荧光强度。 每个