细胞与遗传基础教学课件作者陈可夫付民-11、12、13课件.pptVIP

第一节　基因工程 （四）从基因文库中分离基因 2.筛选基因文库 （2）免疫法筛选 外源DNA在宿主细胞内表达出蛋白质，可与相应的抗体发生免疫反应，再利用二抗、偶联的酶反应筛选目的DNA。 优点：不依赖于基因表达产物的生物学活性，只要抗原决定序列能被正确表达即可。 步骤：将文库中所有的克隆在培养基上培养，然后转到膜上。加入针对该蛋白质的抗体(一抗)，反应后洗脱杂物；再加入针对一抗的抗体(二抗)，二抗上连接有一种酶。再次洗脱后加入该酶的无色底物，产生有颜色的产物。有色斑点即为阳性克隆。 第十三章 基因工程和基因组学 四、基因的分离与鉴定 第一节　基因工程 （四）从基因文库中分离基因 2.筛选基因文库 （3）遗传互补法筛选 获得各种遗传突变细胞株系，当把外源DNA片段引入受体细胞后，如果受体细胞获得某种新性状，那么此片段上一定携带着决定新性状的基因。 生长互补：甲细胞株缺外源激素Ａ不能生长，乙细胞株缺外源激素Ｂ不能生长，则甲、乙融合的杂合细胞在不含激素Ａ、Ｂ的培养基上可能生长。 抗性互补：两个细胞株分别具有两种不同的抗性，则它们的杂合株可在含上述两种抗生素的培养基上生长。 代谢互补。 第十三章 基因工程和基因组学 四、基因的分离与鉴定 第一节　基因工程 （四）从基