5―氮杂―2―脱氧胞苷对HT―29和LoVo结直肠癌细胞株中Wif―1基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响.docVIP

5―氮杂―2―脱氧胞苷对HT―29和LoVo结直肠癌细胞株中Wif―1基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响 　　[摘要] 目的 探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-Aza-2-deoxycytidine，5-Aza-CdR）对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因甲基化水平及蛋白表达的影响。 方法 用不同浓度（0.5、1.0、1.5 μmol/L）5-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR（Methylight）方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验（Western blot）检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中Wif-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。 结果 Methylight检测HT-29和LoVo细胞中Wif-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转；实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5 μmol/L 5-Aza-CdR处理后Wif-1基因mRNA和蛋白重新表达，实时荧光定量PCR检测DMSO对照组和不同浓度5-Aza-CdR（0.5、1.0、1.5 μmol/L）在HT-29细胞株相对表达量分别为（1.000±0.000）、（1.207±0.052）、（1.790±0.033）和（2.016±0.123）；在LoVo细胞株