组织胚胎学绪论__培训课件.pptVIP

医学 组 织 胚 胎 学 生命科学与生物工程学院 zhujunquan@nbu.edu.cn 695225绪 论 1 组织学 研究对象：细胞、组织与器官 研究内容：有机体的基本组织、构成组织 细胞的形态和构造；各种组织构成的器官的组 织形式和联系；细胞、组织与器官之间的相关 性及对环境变化的反应等。 定义：研究机体细微结构及其机能的科学。 2 胚胎学 ◆研究内容 狭义：胚胎发育。 广义：胚前发育+胚胎发育+胚后发育。 ◆定义 研究机体发生及发育规律的科学。 3 组织胚胎学的分科 ◆按研究对象分 植物、动物、人体组织（胚胎）学。 ◆按研究方法分 比较组织学 实验组织学 病理组织学 叙述胚胎学 比较胚胎学 生态胚胎学 化学胚胎学 分子胚胎学 免疫胚胎学 1 一般研究方法 活体观察 切片技术（普通光学显微技术） 2 特殊显微镜的应用 暗视野、相差显、荧光显微镜 电子显微镜、激光共聚焦显微镜 3 其他新技术的应用 显微镜下直接观察 活体染色 血液注入、三胚层染色 细胞与组织培养 细胞系的培养 显微电影（摄影） A 取材与固定：切成3mm3的小块，入固定剂中。  使蛋白迅速被固定，防止组织自溶，尽量保持 组织结构，硬化组织。 B 脱水与包埋：乙醇梯度脱水、二甲苯透明、石 蜡渗透、包埋。 C 切片与染色：将组织块切成5-14微米的薄片， 贴在载玻片上，展片、脱蜡、染色。 甲苯胺蓝染色 碱性染料，可将 细胞内、外的某 些物质染成紫红 色。 异染性：显色与 染料不同的特性 称为异染性。 　用荧光素染色或者标记的细胞或结构。 荧光标记物：用荧光素标记细胞内的某些成分，使其发出不同的荧光。如溴化乙锭与口丫啶橙可与DNA结合。 以荧光素标记抗体，可检测抗原的存在和分布。 　用于观察组织培养中活细胞的形态结构。 能将活细胞不同厚度以及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用转换为光密度差异（明 暗差），易于分辨细胞结构。 细胞培养室内常用的是倒置相差显微镜，其光源和聚光器在载物台的上方，物镜在载物台 的下方，这样便于观察贴附于培养皿底壁的活细胞。 用于观察因反差或者分辨率不足的微小颗粒。 有一个暗视野集光器，使光线不能进入物镜， 故 称暗视野。标本内的 小颗粒产生的衍射光 或者散射光进入物镜。 以激光为光源，光束经聚焦后落在样品的 不同深度，并作移动扫描，通过电信号彩色显 像，经图像分析系统对图像做二维及三维处理。 能对细胞内被荧光标记的结构做微量分析，对细胞内的钙离子以及pH值进行动态分析，测定细胞内的受体移动、膜电位变化、 酶活性和物质转运； 对细胞及其染色体 进行切割、分离、 筛选和克隆。 将电子束在样品上进行扫描，产生的两次电子，用特定的探测器收集放大，形成电子信号传到显像管，在荧光屏上显示图像。 特点：视场大，景深长， 图像真实，富有立体感。 以电子束代替光线，以电磁透镜代替光学透 镜。电子束经电磁场强度放大，射到标本上，最 后在荧光屏上显像细胞内的超微结构。 电镜下所见的 　超微结构染色 　深的，称为电 　子密度高，反 　之为电子密度 　低。 将人体或动物的活细胞、活组织在体外培养，称细胞或组织培养，细胞在体外生存，必须具备适宜的条件，包括营养、O2和CO2的比例、渗透压、pH值、温度和湿度。 利用体外培养细胞，可人为的给以各种不同的条件，研究不同条件对细胞的分裂、分化、结构和功能等的影响，并可用显微摄影等技术记录细胞的动态变化。 细胞化学与组织化学 显示细胞微细结构的化学成分（糖、脂、核酸、酶）和活性。 基本原理：在组织切片和细胞样品上滴加一定的试剂，该试剂与组织内的某些成分发生化学反应，在局部形成有色沉淀物，通过显微镜观察而对组织细胞内的化学成分进行定位、定性和定量，作与功能相关分析的研究。 过碘酸-希夫反应简称PAS反应（period acid Schiff reaction），显示细胞内糖原或多糖。 原理：过碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基变为乙二醛基，乙二醛基与Schiff试剂（无色亚硫酸品红复合物）结合，形成紫红色反应产物。颜色反应的深浅取决于组织内多糖的乙二醇分子的多寡。 核酸组织化学 显示DNA的传统方法是Feulgen反应，切片先用稀盐酸处理，使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接键打开，形成醛基。醛基与Schiff试剂作用 (原理同PAS反应) ，使细胞核DNA显紫红色