人FBXO31基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建和活性的检测.docVIP

人FBXO31基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建和活性的检测 　　【摘 要】目的：构建含有不同长度人FBXO31基因启动子片段的荧光素酶报告基因载体，通过检测荧光素酶活性找到转录活性最强的启动子区域。方法：通过UCSC在线软件分析FBXO31基因启动子序列。从正常人血液基因组DNA中扩增不同长度FBXO31基因启动子片段，将这些启动子片段插入pGL3-basic荧光素酶报告基因载体，构建pGL3-FBXO31-I，pGL3-FBXO31-Ⅱ，pGL3-FBXO31-Ⅲ重组载体。利用脂质体介导的转染技术将这3个重组载体分别导入HEK293，A549和HepG2细胞，检测荧光素酶活性，确定FBXO31启动子转录活性。结果：重组载体的荧光素酶活性由强至弱排列顺序为：pGL3-FBXO31-I，pGL3-FBXO31-Ⅲ，pGL3-FBXO31-Ⅱ。结论：pGL3-FBXO31-I重组载体中含有的FBXO31启动子片段转录活性最强。确定FBXO31启动子转录活性最强区域，为阐明FBXO31基因的转录调控机制奠定了坚实的基础，为运用FBXO31启动子和特异性靶细胞治疗各种遗传性疾病提供了理论依据。 　　【关键词】FBXO31；启动子；荧光素酶 　　【中图分类号】R749.053 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）06-3851-03 　　Const