第九章凝胶过滤及离子交换层析介质.pptVIP

8、凝胶层析的基本操作 1）层析柱的选择 层析柱大小主要是根据样品量的多少以及对分辨率的要求来进行选择。 层析柱的长度对分辨率影响较大，长的层析柱分辨率要比短的高；但层析柱长度不能过长，否则会引起柱子不均一、流速过慢等实验上的一些困难。 一般柱长度不超过100cm，为得到高分辨率，可以将柱子串联使用。层析柱的直径和长度比一般在1:25～1:100之间。 用于分组分离的凝胶柱，如脱盐柱由于对分辨率要求较低，所以一般比较短。 2 ）装柱（凝胶层析柱） a.除去气泡的溶胀凝胶应与层析柱操作温度一致，装柱过程中温度也要恒定; b.应调节有利于装柱的凝胶浆稀稠度，适当稀释有利于装柱过程中气泡的排除; c.将柱子固定在稳定的支架上，并保证其垂直。 d.先向柱内加满洗脱剂，检查是否漏水；再打开出液口，排出里面的气泡，特别是要排除床底支持物上的气泡。关闭出液口，使柱中洗脱剂的体积约占总柱体积的15％; e.柱颈接上胶浆贮存器，将胶浆徐徐注入柱内。注意避免产生气泡; f.柱装好后，停10min，然后打开出液口，排出过量洗脱剂; g.柱内胶面上部保留2～3cm洗脱剂。再将恒压洗脱剂瓶与柱上端相连。流过至少2倍柱体积的洗脱剂之后，流速开始稳定下来; h.调节恒压洗脱剂瓶的高低位置，得到理想流速。检查流体静力压，不要超过规定值。如果使用蠕动泵，注意使流速不超过稳定后利用重力调节所达到的