分子生物学实验四.pptVIP

分子生物学实验 实验四 原核细胞质粒DNA的提取 水浴锅 * * 考试 第17周 原核蛋白质SDS电泳 第15周 目的基因的PCR扩增与检测 第14周 质粒DNA的转化 第13周 细菌感受态的制备 第12周 凝胶电泳回收和纯化DNA片段 第11周 限制性内切酶酶切质粒DNA 第10周 紫外吸收测定核酸含量 第9周 核酸的琼脂糖凝胶电泳 第8周 原核细胞质粒DNA的提取 第7周 从动物组织提取DNA 第5周 从植物组织提取DNA 第4周 分子生物学实验仪器设备简介和实验有关内容介绍 第3周 一、实验原理 由溶菌酶破坏细胞壁的糖肽层再经经EDTA破坏带有质粒的细菌外膜系统，再经去垢剂SDS变性作用，使细胞膜蛋白质变性裂解而使胞内DNA全部释放出来。质粒DNA具有较强的耐剪切和耐碱特性（pH12.0～12.6），且恢复中性后又呈天然构型，而染色体DNA仍处于变性状态，用乙酸钾沉淀变性的蛋白质和染色体，再用乙醇沉淀上清液中的质粒DNA，便可得到含染色体DNA较少的质粒DNA粗提物，可直接用于酶切和转化实验。 二、材料与设备 E.coli 菌株；冷冻离心机，高压灭菌锅，恒温培养箱，超净工作台　 三、试剂与配制 1)质粒DNA碱裂解法试剂： 溶液I： 葡萄糖 50 mmol/L