分子生物学实验五.pptVIP

分子生物学实验 实验五 核酸的琼脂糖凝胶电泳 电泳概念 电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象。 颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则泳动速度慢。 迁移率还与分子的形状，介质粘度，颗粒所带电荷有关，迁移率与颗粒表面电荷成正比，与介质粘度及颗粒半径成反比。 缓冲液 TAE：乙酸盐缓冲液 TBE：硼酸盐缓冲液 TPE：磷酸盐缓冲液 1 kb DNA ladder（marker）: 在第一个上样孔或最后一个上样孔内加入6?l 的 1 kb DNA ladder（10ng/?l ）。 * * 1、实验目的： 学习与掌握DNA电泳的技术方法，利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、含量以及分子量，及分离不同大小的DNA片段。 2、实验原理： 电泳概念及种类* 影响琼脂糖电泳迁移的主要因素* ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － 带负电粒子 带正电粒子 正 极 负 极 影响琼脂糖电泳迁移的因素 主要因素 DNA的大小 DNA的构象 琼脂糖浓度 缓冲液 外界因素 电场强度 溶液的pH值 溶液的离子强度 温度的影响 支持物的影响 凝胶中的琼脂糖含量[%（W/V）] 线状DNA分子的有