蛋白质组学概述.ppt

§2 肽质量指纹谱鉴定蛋白质技术 特定的质量，且产生的片段数目亦有特异性，故称指纹谱。 肽质量指纹谱 (peptide mass fingerprinting, PMF)是指蛋白被酶切位点专一的蛋白酶水解后，得到的肽片段质量图谱。由于所产生的肽段具有特定序列、长度，因而具有 为什么要酶切蛋白样品？ 蛋白分子往往有许多的修饰位点，而且这些修饰未必均一，因而，难以通过质量直接确定样品为何种蛋白。 但如果进行酶切后，产生了多条肽段，其中有些肽段是没有修饰位点或未被修饰的，其质量信息，能准确反应肽段的氨基酸构成情况，在数据库中查找、比对时，便可知这类肽段源于何种蛋白，进而确定样品是何种蛋白。这是对蛋白分子进行胶上酶切的重要原因之一。 此外，酶切产生肽段数目固定，是肽质量指纹图谱的重要信息；18O从头标记也需要对蛋白分子进行酶切。 常用酶类 要 求： 水解为点专一； 切出的肽段适合质谱分析（约几千Da），利于检索； 酶自身稳定，不易降解。 常用酶类： 胰蛋白酶和Glu-C蛋白酶等。 §3 液相色谱—电喷雾—串联质谱 一、电喷雾电离源的工作原理 利用高压电场使进样端的毛细管流出的液滴带电，在N2气流作用下： 液滴溶剂蒸发——表面积减小