实验二胰蛋白酶抑制剂的分离纯化和活性测定.pptVIP

实验二 胰蛋白酶抑制剂的分离纯化和活性测定（P40） 一、实验目的 （1）了解胰蛋白酶抑制剂的制备方法； （2）了解胰蛋白酶抑制剂抑制活性测定的原理和方法； （3）掌握离心机和微量移液器的使用方法。 二、实验原理 胰蛋白酶抑制剂是对胰蛋白酶有抑制活性的蛋白质。 利用蛋白质可溶于水或提取液中的性质，可用水或提取液从富含胰蛋白酶抑制剂的材料中抽提胰蛋白酶抑制剂，利用盐析使胰蛋白酶抑制剂沉淀出来，得到含有胰蛋白酶抑制剂的蛋白质制品。 在制备过程中通过测定对胰蛋白酶的抑制活性进行跟踪检测。 二、实验原理 胰蛋白酶可作用于其底物苯甲酰-L精氨酰-对硝基苯胺(BAPNA)，使BAPNA发生水解，生成苯甲酰-L-精氨酸和淡茶色的对硝基苯胺，使溶液变成淡茶色。 如果在此活性测定系统中加入过量的胰蛋白酶抑制剂，过量的抑制剂与胰蛋白酶竞争底物，抑制了胰蛋白酶的水解活性，不能使底物水解，无对硝基苯胺的生成，不能使溶液变成淡茶色，而呈现无色，从而表现出胰蛋白酶的抑制活性。 本实验以大豆为主要原料，制备胰蛋白酶抑制剂，并测定其抑制活性。 二、实验原理 BAPNA BA p-NA 三、试剂与仪器 （一）试剂 0.2 mol/L Na2HPO4，0.2mol/L NaH 2P04。 0.8mol/L磷酸缓冲液；36mL 0.2mol