薄层色谱法综述.pptVIP

第八章 薄 层 色 谱 法（Thin-layer Chromatography，TLC） 目 录 一 基本原理 二 操作方法 三 在药物分析中的应用 第一节 基本原理 薄层色谱与液相色谱法比较 薄层色谱特点 (1)快速(数十秒~数十分钟) (2)分离效率高(多柱路) (3)灵敏度高 (斑点扩散小,比纸色谱高10-100倍) (4)专属性强 (5)选择性好 (6)操作简便、设备简单 二. 基本参数 三.TLC固定相 （一） 对吸附剂的要求 有足够大的表面积及足够的吸附力 对不同组分的吸附具有较好的选择性 不与流动相作用，质量稳定，颗粒均匀 （二） 吸附剂的种类 常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺等。 吸附剂的种类不同，可分离、分析的物质也不尽相同。 （三） 吸附剂的选择原则 吸附剂的选择：主要决定于样品成分的性质，即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与吸附剂起化学反应等。 弱酸性试样宜选择硅胶、酸性或中性氧化铝； 试样无色无荧光，选择添加无机荧光剂的硅胶 极性小的试样选择吸附活性强的吸附剂 极性大的试样选择活性较弱的吸附剂 四.TLC流动相 （一） 流动相的选择依据 “相似相溶” 极性大的组分选用极性大的展开剂分离 极性小的组分选择极性小的展开剂分离 （二） 流动相的选择方法 展开剂的选择一般从常用的溶剂开始，然后根据被分离组分在薄层板上的分离效果，进一步考虑通过改变展开剂的极性或采取混合溶剂来达到满意的分离效果。 对于结构差异较小或物质极性接近的难分离组分，采用二元、三元甚至多元溶剂做展开剂效果好。 对于具有酸碱性的物质来说，可在展开剂中加入一定量的酸或碱调节pH，以获得满意的分离效果。 第二节 操作方法 制板 点样 展开 定位与显色 结果分析 （一）干法制备软板 定义：采用干法在吸附剂中不加含粘合剂而制成的薄层板称为软板。 操作：吸附剂撒在玻璃板一端 玻璃棒两端套上塑料管或胶管 玻璃棒从撒有吸附剂的一端向前推动 特点：操作简便、快速，但是不牢固、容易吹散、吸附剂容易脱落、展开后不能保存、斑点扩散严重、分离效果较差。 （二）湿法制备硬板 定义：在吸附剂中加入粘合剂所制成的薄层板称为硬板。 操作：吸附剂与粘合剂按照1:3比例置于研钵中研磨 制板 自然阴干 放烘箱活化 使用之前检视 1.倾注法：将已调成糊状并去除气泡的吸附剂倾倒在玻璃板上，用玻璃棒均匀摊开，然后轻轻振荡，使薄层均匀即可。 2.平铺法：在水平台上放置玻璃平板，将准备好的薄层用玻璃板置于此板上，在玻璃板两边加上玻璃条制成框边，将已调成糊状并去除气泡的吸附剂倒在中间玻璃板，用玻璃棒向一定方向均匀地将吸附剂刮平，最后去掉边玻璃框，逐块将薄层板轻轻振荡均匀。 3.机械涂铺法：涂铺器中安装有一盛装吸附剂的槽，当槽移动时，吸附剂便从其出口流出，均匀涂铺在玻璃板上。 二、点 样 1.样品溶剂 要求溶剂易挥发，点样斑点不容易扩散。一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机溶剂，避免使用水作溶剂。 2.点样设备 毛细管、微量注射器、定量毛细管、微量吸管、自动点样仪、半自动点样仪。 3.点样量 点样量的多少与展开结果直接相关，过大会造成斑点拖尾，过小会得不到清晰的斑点，常用量为几至几十μg，制备型的分离可以点样到mg量。总之点样量随分离目的而定。 4.点样过程 确定点样位置 吸取点样溶液 点样。 三、展 开 1. 展开装置 2. 展开方式 3. 展开操作方法 4. 展开注意事项 1.展开装置 长方型展开槽 直立型展开槽 2.展开方式 (1)近水平展开：将点样后的薄层板下端浸入展开剂0.5cm，薄层上端垫高使薄层与水平成15-30o的角。 (2)上行展开：将点样后的薄层放在盛有展开剂的直立型的展开槽中，展开剂由薄层下端借毛细管作用上升至前沿。 (3)多次展开 (4)双向展开 3.展开操作方法 a.根据实际情况选择合适的展开缸 b.展开缸预先用展开剂饱和 c.将点好样的薄层板放入展开缸的展开剂中 d.待薄层板展开至规定距离后，取出薄层板，晾干 4.展开注意事项 a.原点不能浸入展开剂中 b.展开时展开剂蒸汽应达到饱和 c.展开缸的密封性要好 四、斑点定位 展开完毕后，把薄层从层析缸中取出，用铅笔划出或小针刺出展开剂前缘的位置，随即进行显色，以确定各个斑点的位置、Rf值和显色情况，从而判断试样中含有哪些组分。 有色物质经展开后呈现明显的色斑，很易判断。