基因工程复习V2.1.docVIP

第一章 绪论 名词解释(镇鸿) 基因工程：通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源目的基因以及蛋白质的活性表达，使转基因生物获得新的遗传性状的操作。 基因操作：泛指对基因进行酶切、连接、转化等分子生物学操作，是基因工程的技术基础。 遗传工程：根据遗传学原理，按照人们预先设计的生物蓝图，对生物的遗传物质进行有计划的操作，以达到定向改造生物的遗传组成，使其获得新的遗传性状，这个工程称为遗传工程。包括常规的有性杂交育种，染色体工程，细胞工程以及基因工程等。 基因克隆：是指对基因进行分离和扩大繁殖等操作过程，其目的在于获得大量的基因拷贝，它在技术上包括载体构建、大肠杆菌遗产转化改良。 什么是基因工程？它包括哪些环节？ 基因工程是通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源目的基因以及蛋白质的活性表达，使转基因生物获得新的遗传性状的操作。 具有以下几个重要特征：。 基因工程与基因操作、基因克隆、遗传工程等概念有什么异同？ 基因操作泛指对基因进行酶切、连接、转化等分子生物学操作，是基因工程的技术基础。 基因克隆是指对基因进行分离和扩大繁殖等操作过程，其目的在于获得大量的基因拷贝，它在技术上主要包括载体构建、大肠杆菌遗传转化、重组子筛选和扩大繁殖等环节，很多时候并不涉及动物、植物等的转化及性状的遗传改良，显然与基因工程不完全一致。 遗传工程广义的是指所有能改变生物体遗传性状的技术，包括常规的有性杂交育种、染色体工程、细胞工程以及基因工程等。 基因工程的基本条件有哪些？它们各自在基因工程中起着什么作用？ ①目的基因:?是开展基因工程的目标和物质基础。 ②载体:?是运载工具，引入的外源基因到宿主细胞中，使其进行复制或表达。 ③工具酶:?指体外进行DNA合成、切割、修饰和连接等系列过程中所需要的酶。 ④受体细胞: 摄取外源目的DNA并使其稳定维持和表达。 基因工程的技术策略有哪些？ （1）强化基因的表达，通过增强目标性状对应基因的拷贝数，提高目的酶表达量与活性，实现目标性状的改良。 （2）关闭特定基因的表达，实现目标性状的改良。 （3）基因的异源表达赋予生物新的功能。 第二章：基因工程酶学基础 名词解释（仁杰） 限制性内切酶：能识别DNA的特异序列，并在识别位点或其附近切割双链DNA的一类内切核酸酶。黏性末端：DNA分子在限制性内切核酸酶的作用下形成的具有互补碱基的单链延伸形成的末端结构。平末端：限制性内切核酸酶在识别序列的对称轴上切割，形成的片段为平末端。同切点酶：又称同裂酶，是一类来源于不同的微生物、能识别相同靶序列的限制性内切核酸酶。同尾酶：来源不同，识别靶序列也不同，但切割后能产生相同的黏性末端的限制性内切核酸酶。DNA连接酶：能催化双链DNA片段靠在一起的3羟基末端和5端磷酸基团末端之间通过形成磷酸二酯键，使两末端连接的一种核酸酶。DNA聚合酶：在引物和模板存在下，把脱氧核糖单核苷酸连续的加到双链DNA分子引物链的3-OH末端，催化核苷酸的聚合作用的一类酶。反转录酶：依赖于RNA的DNA聚合酶，普遍存在于含RNA的反转录病毒中，以RNA为模板，催化合成互补的DNA单链，进而合成DNA的第二条链。末端脱氧核苷酸转移酶：简称末端转移酶（TDT），一般从小牛胸腺中提取的一种碱性蛋白，在末端转移酶的催化下将脱氧核苷酸添加到DNA分子的3-OH末端，伴随无机磷酸的释放。碱性磷酸酶：能够催化核酸分子脱掉5的磷酸基团，从而使DNA（或RNA）片段的5-P末端转化成5-OH末端。脱氧核糖核酸酶I：简称DNA酶I（DNase?I），来源于牛胰脏的糖蛋白，需要二价阳离子的内切核酸酶，能从嘧啶核酸5端磷酸基处随机降解单链或双链DNA，生成具有5磷酸末端的寡核苷酸。（有Mg2+存在时，DNase?I能在双链DNA上随机独立的产生切口，在Mn2+存在时，则在双链DNA的大致同一位置上切割，产生平末端DNA片段。） ①识别序列的特异性：识别序列为4-6bp的双重螺旋对称结构的回文序列 ②切割位点的特异性：在识别序列内或附近特异切割双链DNA分子，水解磷酸二酯键，产生3’端羟基、5’端磷酸基团的DNA片段。 2. 大肠杆菌DNA聚合酶I有哪些不同的酶活力特性，各有何利用价值？ 【 （1） 5→3 聚合酶活性 大肠杆菌DNA聚合酶I的聚合酶活性是以DNA为模板，利用体系中的4种脱氧核糖核苷（dNTP），催化单核苷酸分子加到引物的3 -OH末端，沿5→3合成与模板互补的另一条DNA链，模板DNA可以是单链或双链DNA分子，双链DNA只有在其一条链上有一个或数个断裂时才可以作为有效模板。2） 3→5 外切酶活性 大肠杆菌DNA聚合酶I的