第八章 微生物的遗传与育种.pptVIP

大肠杆菌基因组很大（全部转移 需要100分钟），其遗传图谱须用 多株F因子整合在不同位置的Hfr 菌才能完成 3）F′×F-杂交 Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时，形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，特称为F′因子。 F′×F-与F+×F-的不同： 供体的部分染色体基因随F′一起转入受体细胞 a）与染色体发生重组； b）继续存在于F′因子上，形成一种部分二倍体； 细胞基因的这种转移过程又常称为性导（sexduction）、F因子转导（F-duction），或F因子媒介的转导（F-mediated transduction）。 “接合” “转导” 及“转化”这三种在自然界中存在的细菌遗传重组过程各自的特点： 外源DNA的来源及进入途径有差异 （五）原生质体融合 二、真核微生物的基因重组 （一）有性杂交 细胞（ ＋） 细胞（－） 有性接合 染色体重组 新遗传型 能产生有性孢子的酵母菌、霉菌和蕈菌都可以进行有性杂交 （二）准性杂交 细胞（ ＋） 细胞（＋） 准性接合 基因重组 新遗传型 菌丝联结 质配 核配 有丝分裂交换 单倍体杂合子 在半知菌类中最为常见 半知菌的准性生殖 准性杂交育种 第四节 基因工程 特点：可设计性、稳定性、远缘性、风险性 一、基因工程 定义：在基因水平上，改造遗传物质，从而使物种发生变异，创建出具有某种稳定新性状的生物新品系。 获得目的基因 选择基因载体 体外重组 外源基因导入（细菌、植物、动物、基因枪） 筛选和鉴定 应用 二、基因工程的基本操作 复制子 限制性内切酶位点 选择性遗传标记 可大量增殖 载体的特性 常用载体 原核受体细胞： 松弛型细菌质粒、λ噬菌体 真核细胞受体： SV40病毒（动物）、Ti质粒（植物） 第四节 菌种的衰退、复壮和保藏 衰退与复壮的概念 衰退（degeneration）：在微生物的生长过程中，由于变异的存在，使原有的优良性状发生负变，即菌种的衰退。 复壮(rejuvenation)：狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种 防止菌种衰退的方法 控制传代的次数（一般在DNA的复制过程中，碱基的错配率是5x10-4，自发突变的频率为10-8~10-9，采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代的次数） 创造良好的培养条件 利用不同类型的细胞进行接种传代：对丝状微生物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种。 采用有效的菌种保藏方法 菌种的复壮措施 纯种分离 菌落纯的分离方法（平板表面涂布法，平板划线分离法，琼脂培养基浇注法） 细胞纯的分离方法（分离小室进行单细胞分离，显微操纵器进行单细胞分离，菌丝尖端切割法进行单细胞分离） 通过宿主体内生长进行复壮 （如Bacillus thuringiensis的复壮） 淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体） 二、菌种的保藏 菌种保藏机构的任务：广泛收集实验室和生产菌种、菌株（包括病毒株以及动、植物细胞株和质粒等）的基础上，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 常用的菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 菌种保藏的原理 挑选典型菌种的优良纯种 一般采用微生物的休眠体（如孢子、芽孢等） 创造适于微生物长时期休眠的环境条件（如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂或酸碱中和剂等） 菌种保藏的方法 菌 连续在培养基上（内）移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 法