2015-2016高中生物专题53血红蛋白的提取与分离新人教版选修1探讨.ppt

相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为下图中哪一个(　　) [答案]　B [解析]　本题考查对凝胶色谱法分离蛋白质原理的理解，蛋白质相对分子质量越大，越容易通过凝胶间隙而先被洗脱，蛋白质相对分子质量越小则易进入凝胶内部而后被洗脱。 思 维 创 新 升 华 一、蛋白质分子在凝胶中的运动情况分析 特别提示：凝胶色谱的原理是相对分子质量小的蛋白质进入凝胶孔道，路程长，移动速度慢；而相对分子质量大的蛋白质在凝胶外部移动，路程短，移动快，这种现象又称分子筛效应。 相对分子质量大 相对分子质量小 直径大小 大于凝胶颗粒空隙直径 小于凝胶颗粒空隙直径 运动方式 垂直向下运动 无规则的扩散运动 运动速度 较快 较慢 运动路程 较短 较长 洗脱次序 先从凝胶柱中洗脱出来 后从凝胶柱中洗脱出来 二、样品处理、分离与纯化的目的不同 目的 红细胞洗涤 去除杂质，如血浆蛋白 血红蛋白释放 使红细胞破裂，释放血红蛋白 分离血红 蛋白溶液 经过离心使血红蛋白 与其他杂质分离开 透析 除去样品中相对分子质量较小的杂质 纯化 除去相对分子质量较大的蛋白质 知 识 体 系 构 建 [答案]　较慢　较快　pH　带电性质　凝胶色谱法 专题五　课题3　 成才之路 · 高中新课程 · 学习指导 · 人教版 · 生物 · 选修1 专题五　DNA和蛋白质技术 成才之路 · 高中新课程 · 学习指导 · 人教版 · 物 · 选修1 DNA和蛋白质技术 专题五 课题3　血红蛋白的提取与分离 专题五 课 堂 合 作 探 究 2 思 维 创 新 升 华 3 知 识 体 系 构 建 4 课 时 作 业 5 课 前 预 习 导 学 1 课 前 预 习 导 学 1.掌握提取生物大分子的基本过程和方法。(重点) 2．理解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。(重、难点) 3．尝试对血液中的血红蛋白进行提取和分离。 一、凝胶色谱法 1．概念：也称做___________，是根据________________分离蛋白质的有效方法。 2．原理 当_______________不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量________的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程________，移动速度________，而相对分子质量________的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在____________移动，路程________，移动速度________，从而使_______________不同的蛋白质分子得以分离。 分配色谱法 相对分子质量大小 相对分子质量 较小 较大 较慢 较大 凝胶外部 短 快 相对分子质量 二、缓冲溶液 1．作用：在一定范围内，抵制________的________对溶液pH的影响，维持pH__________。 2．配制：由________种缓冲剂溶解于________中配制而成，通过调节缓冲剂的________就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。 外界 酸和碱 相对稳定 1～2 水 使用比例 三、电泳 1．概念：指________在电场的作用下发生的________的过程。 2．原理：在一定的________下，________、________等生物大分子的可解离基团会带上________或________，在________的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷________的电极移动。 带电粒子 迁移 pH 多肽 核酸 正电 负电 电场 相反 3．作用：电泳利用了待分离样品中各种分子________的差异及分子本身的________、________的不同，使带电分子产生不同的________，从而实现样品中__________的分离。 4．方法：常用的电泳方法有________________和___________________。测定蛋白质分子量时通常使用______________________________。 带电性质 大小 形状 迁移速度 各种分子 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胺电泳 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 四、实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步：________、________、________和__________。 1．样品处理 (1)红细胞的洗涤：目的是____________。采用__________离心，吸取血浆后加________洗涤，直至上清液中没有________，表明红细胞已洗涤干净。 (2)血红蛋白的释放：在________和________的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。 样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定 去除杂蛋白 低速短时间 生理盐水 黄色 蒸馏水 甲苯 (3)分离血红蛋白