【卓越学案】2017高考生物总复习 第12单元 第42讲 微生物的培养与应用学案.docVIP

第42讲 微生物的培养与应用 [考纲点击]　1.微生物的分离和培养　2.培养基对微生物的选择作用　3.利用微生物发酵来生产特定的产物 一、微生物的实验室培养 1．培养基 (1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)营养构成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 (3)种类：按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。 2．无菌技术[连一连] 3．大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 配制步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。 (2)纯化大肠杆菌 ①纯化大肠杆菌，其关键的步骤是接种。 ②纯化培养方法：平板划线法和稀释涂布平板法。 ③纯化培养原理：在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。 二、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 1．分离原理 土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。以尿素为唯一氮源的培养基能促进分解尿素的细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长，从而将目的菌分离。 2．统计菌落数目 统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。 3．实验流程 土壤取样→制备培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数。 三、分解纤维素的微生物的分离 1．纤维素酶 (1)组成：纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。 (2)作用 2．菌种筛选 (1)方法：刚果红染色法。 (2)原理 即：使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 3．筛选流程 土壤取样：富含纤维素的环境 　↓ 选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量 　↓ 梯度稀释 　↓ 涂布平板：将样品涂布于含CR的鉴别纤维素分解菌的培养基上 　↓ 挑选产生透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈 1．培养基 (1)培养基的概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)培养基的营养成分：培养基可为微生物提供碳源、氮源、无机盐和水等主要营养物质。 2．无菌技术 (1)措施：无菌技术的主要措施包括消毒和灭菌。 (2)常用方法：培养基灭菌常采用高压蒸汽灭菌法，接种环灭菌常采用灼烧灭菌法。 3．微生物的纯化与计数 (1)纯化微生物的方法：常用平板划线法和稀释涂布平板法。 (2)微生物的计数方法：常用显微计数法和稀释涂布平板法。 4．微生物的筛选 (1)尿素分解菌的筛选：以尿素为唯一氮源的选择培养基可以筛选分解尿素的细菌。 (2)尿素分解菌的鉴别：在以尿素为唯一氮源的选择培养基中添加酚红，指示剂可以鉴别分解尿素的细菌。 (3)纤维素分解菌的筛选：利用富含纤维素的选择培养基可以选择培养分解纤维素的微生物。 (4)纤维素分解菌的鉴别：在富含纤维素的培养基中添加刚果红，可以从周围存在不变红的透明圈的菌落中挑选分解纤维素的微生物。 考法一　培养基及微生物的纯化培养技术 1．培养基的种类 (1)按物理状态分类 培养基种类 特点 用途 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 固体培养基 加凝固剂(如琼脂) 微生物分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏　 (2)按功能分类 种类 制备方法 原理 用途 举例 选择培养基 培养基中加入某些化学物质 依据某些微生物对某些物质的特殊需求或抗性而设计 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 培养基中加入某种指示剂或化学药品 产生特定的颜色或其他变化 鉴别不同种类的微生物 用伊红—美蓝培养基鉴别大肠杆菌 2．消毒和灭菌的比较 项目 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物　　　 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高温的液体 化学药剂消毒法 用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌法 接种工具 干热灭菌法 玻璃器皿、金属工具 高压蒸汽 灭菌法 培养基及容器的灭菌 3.纯化微生物的接种方法 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 原理 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基上。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 优点 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 可以计数，可以观察菌落特