细胞工程实验操作.docVIP

什么是细胞工程 细胞工程按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。细胞工程所涉及的范围很广，按生物类型可以分为动物细胞工程、植物细胞工程和微生物细胞工程，按实验操作对象可以分为细胞与组织培养、动物融合、细胞核移植、染色体操作、转基因生物等。以细胞工程为基础，发展派生出了不少以工程冠名的新领域，如组织工程、胚胎工程、染色体工程等。 什么是消毒disinfection 是指杀灭或去除外环境中媒介物携带的病源微生物的过程。 什么是干细胞 stem cell 干细胞是指具有自我更新和分化潜能的细胞。 什么是细胞融合 cell fusion 又称细胞杂交 ，是指两个或两个以上的细胞融合形成一个细胞的过程。 什么是细胞培养 cell culture 是指生物细胞在离体条件下的生长和增殖，细胞的离体培养称为细胞培养。 基因治疗gene therapy 指将外源功能性目的基因导入患者体内，通过调控目的基因表达，抑制、替代或补偿缺陷基因，从而恢复受累细胞、组织或器官的生理功能，达到疾病治疗目的。 转基因动物 transgenic animal 借助基因工程技术将外源基因导入受体动物染色体内，外源基因与动物基因整合后岁细胞的分裂而扩增，在体内表达并能稳定的遗传给后代的动物。 ES细胞 embryonic stem cell 当细胞团的细胞分离出来进行培养，在一定条件下这些细胞可在体外“无限期”地增殖传代，同时还保持其全能性。这种干细胞称为胚胎干细胞即ES细胞。他是一种高度未分化细胞，具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。 什么是克隆 clone 克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。 什么是染色体 Chromosome 染色体是细胞内具有遗传性质的物体,易被碱性染料染成深色,所以叫染色体(染色质),其本质是脱氧核甘酸. 什么是细胞污染cell contamination 在细胞培养中，凡是与培养无关的杂质的混入培养系统称为污染 二、简答题 1.重组DNA技术的一般步骤 （1）目的基因的获取 　　目前，获取目的基因的方法主要有三种：反向转录法、从细胞基因组直接分离法和人工合成法。 　 （2）DNA分子的体外重组 　　体外重组是把载体与目的基因进行连接。 （3）DNA重组体的导入 把目的基因装在载体上后，就需要把它引入到受体细 胞中。导入的方式有多种，主要包括转化、转导、显微注射、微粒轰击和电击穿孔等方式。转化和转导主要适用于细菌一类的原核生物细胞和酵母这样的低等真核生物细胞，其他方式主要应用于高等动植物的细胞。 （4）受体细胞的筛选与鉴定 由于DNA重组体的转化成功率不是太高，因而，需要在众多的细胞中把成功转入DNA重组体的细胞挑选出来。应事先找到特定的标志，证明导入是否成功。 （5）基因表达 目的基因在成功导入受体细胞后，它所携带的遗传信息必须要通过合成新的蛋白质才能表现出来，从而改变受体细胞的遗传性状。目的基因在受体细胞中要表达，需要满足一些条件。 2、细胞融合一般采用哪几个方法，一般经历哪几个步骤 方法：诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。 病毒诱导融合：病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；② 破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。 电融合：是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用 高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。 步骤：以动物细胞为例 （1）细胞准备。分贴壁和悬浮细胞两种。前者可直接将两亲本细胞混合培养，后者需制成一定浓度的细胞悬浮液。 　　 （2）细胞融合，加促融因子于将行融合的细胞之中，诱导融合。 　　 （3）杂种细胞选择。利用选择性培养基等，使亲本细胞死亡，而让杂种细胞存活。 　　 （4）杂种细胞克隆。对选出的杂种细胞进行克隆（选择与纯化），经过培养，就能获得所需要的无性繁殖诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）。 3、细胞生长的测定方法