分子期末总结A.doc

一、乳糖操纵子的结构 操纵子（operon）是细菌基因表达和调控的一个单元，包括结构基因和DNA上可以被调控基因产物（比如调节蛋白）所识别的控制元件。 1、结构基因，lacZ, lacY 和 lacA成簇排列 上述三个基因由同一个启动子（P）控制，转录出一条多基因mRNA，这个启动子的转录起始受调控。 2、控制区域，包括： 操作子（operator，O），位于它所控制的结构基因的上游，与之毗邻。（不能误称为操作基因） 启动子（promoter，P），位于阻遏蛋白基因和操作子之间。不能单独起始结构基因的高水平表达。 操作子和启动子存在部分重叠，而且重叠区域位于转录起始点周围。 CRP结合位点，与启动子相邻，其中心位于–61处。 3、调节基因lac I，位于启动子左侧，编码一种能与操作子相互作用的阻遏蛋白。 二．乳糖操纵子负控诱导系统的调控机理 细胞内没有诱导物乳糖存在时，阻遏蛋白能够与操作子结合。由于操作子与启动子有一定程度的重叠，因此妨碍了RNA聚合酶在-10序列上形成开放性启动子复合物，lacZYA不能转录。 lac mRNA非常不稳定，半衰期仅约3分钟。这一特性使诱导能够很快逆转：只要诱导物一撤出，游离的阻遏蛋白重又结合操作子，转录就停止；很短的时间内，就会lac mRNA降解，细胞又回到原来的基本状态。 由于mRNA很快降解，蛋白的合成也会很快终止。β-半乳糖苷酶稍微稳定些，所以在细菌细胞内存在的时间稍长一些。 这样，细菌就能在外部环境存在乳糖时，快速开启乳糖操纵子，而当没有乳糖时，又能快速关闭乳糖操纵子，避免合成不必要的蛋白、酶类。 8.2.6 乳糖操纵子的协调调节 当培养体系中有葡萄糖时，cAMP浓度很低，CRP没有活性，不能结合在调控区域，因而RNA聚合酶不能在启动子处形成封闭复合物，即使有乳糖，乳糖也不能被吸收利用，因而不能除阻遏，所以乳糖操纵子不表达。 当培养体系中没有葡萄糖时，cAMP浓度增高，形成有活性的cAMP-CRP复合物，使RNA聚合酶在启动子处形成封闭复合物。此时若没有乳糖，阻遏蛋白结合操作子，阻碍封闭复合物转换为开放复合物，乳糖操纵子不表达。若此时有乳糖，阻遏蛋白结合诱导物（别乳糖），改变构象，从操作子解离，封闭复合物转换为开放复合物，乳糖操纵子表达。 总之，通过正控制途径，监测培养体系中是否有葡萄糖，若有，确保优先利用；通过负控制途径监测培养体系中是否有乳糖。若没有葡萄糖时，可以利用。 三、阻遏蛋白：（控制Lac操纵子的阻遏蛋白）是由四个相同的亚基组成的四聚体。每个细胞中含有5到10个这样的四聚体。阻遏蛋白含量少（这确保了乳糖操纵子能够灵敏、快速响应诱导物）。尽管是组成型表达，但由于lacI的启动子与RNA聚合酶的结合能力很低，所以lacI的转录水平很低。　 四．lacI?–d 突变 突变位点位于DNA结合域，是dominant-negative（显性阴性的，显性失活的）突变，使四聚体失去结合DNA的能力。 在（部分）二倍体时， lacI?–d 产物参与87.5%的四聚体的生成，其中40%不能与操作子结合。 五．葡萄糖阻遏（Glucose repression，分解代谢物阻遏，Catabolite repression）是指由于葡萄糖的添加，细菌中许多的操纵子表达水平降低的现象。 六．Trp（色氨酸）操纵子的弱化作用（衰减作用，attenuation）——基因转录的翻译调控 E.coli的trp操纵子第一层控制是前述的负控诱导；弱化作用是第二层控制。 在trp（色氨酸）操纵子转录出的mRNA的5’前导序列中有一段区域，称作弱化子（attenuator，衰减子），含有一个小的开放阅读框。弱化作用实际上就是由这个开放阅读框的翻译速率控制转录是否（在弱化子处）终止，这使得E.coli能够检测色氨酸的第二种状态，即Trp-tRNA。 弱化的作用实质上是以翻译手段来控制基因的转录。 弱化调控作用可看作这样一种机制：核糖体相当于一种正调控蛋白，它在停顿位点的结合是RNA继续转录所必须的；而相应的氨酰基-tRNA相当于辅阻遏物，它与核糖体结合，使核糖体不能结合在停顿位点，转录受阻。所以，通过前导肽的翻译来控制mRNA的合成的机制就是一种可阻遏的正控制。 七． 严谨反应（stringent response）——当细菌处于恶劣生长条件，没有足够的氨基酸供其合成蛋白时，就会关闭大批代谢活动，这称作严谨反应。（严谨反应导致两种非正常的核苷酸积累：ppGpp和 pppGpp。这些核苷酸是典型的小分子效