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浅析超声波法乙醇提取山楂叶黄酮
浅析超声波法乙醇提取山楂叶黄酮
文章标题:浅析超声波法乙醇提取山楂叶黄酮
摘要:楂叶中有效成分黄酮的提取,目前广泛使用的乙醇提取法存在提取温度高、时间长等缺点,本文研究在超声波条件下,采用正交实验设计考察了乙醇浸提山楂叶中黄酮的提取工艺条件。
关键词:超声波;乙醇;山楂叶;黄酮
作者简介:邓光辉(1957-),男,教授,主要从事天然产物化
学研究。
基金项目:广西省科学基金项目(桂科基:0236037),广西教育厅项目(桂教科研[2002]316号)资助
黄酮类成分有降压、降血脂、增加冠脉流量、强心、抗心律不齐等药理作用。山楂果肉及山楂叶中含有丰富的黄酮类化合物,由于其对心脑血管疾病有显著疗效而被受人们的关注。山楂叶中有效成分黄酮的提取,目前广泛使用的乙醇提取法,是采用索氏提取器回流提取。但此方法存在提取温度较高、提取时间长、乙醇消耗大、成本高等缺点。超声技术应用于提取山楂叶中黄酮的研究尚未见报道。本研究在超声波条件下,采用正交实验设计考察了乙醇浸提山楂叶中黄酮的提取工艺条件。
1实验部分
1.1材料试剂与仪器
KQ-32000DB型数控超声波仪(昆山超声仪器有限公司);916型紫外-可见分光光度计(澳大利亚GBC公司),离心沉淀器,分析天平(上海第三分析仪器厂),循环水式多用真空泵。
山楂叶:采自广西靖西。
芸香叶苷:即芦丁(中国生物制品鉴定所)。
1.2实验方法
1.2.1芦丁标准曲线的绘制
芦丁的测定采用亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法。精密称取芦丁42.5mg,用60的乙醇溶解并稀释至250mL,作为芦丁标准液。精密量取1、2、3、4、5、6mL芦丁标准液,分别置25mL容量瓶中,各加水至6mL,加5亚硝酸钠溶液1mL,混匀,放置6min;加10硝酸铝溶液1mL,混匀,放置6min;加氢氧化钠试液10mL,再加水至刻度,摇匀,放置15min;以试剂空白作参比,用1cm比色皿在500nm波长处测定吸光度。所得数据经回归处理,回归方程为y=0.0885A 0.0013,r=0.9998。芦丁浓度在0.02-1.212mg/ml范围内具良好的线性关系。
1.2.2山楂叶中总黄酮含量测定
将剪碎的山楂叶2.0g置于索氏提取器中,加入100mL60乙醇液索氏回流提取3h,将提取液过滤,残渣用60乙醇液洗涤3次,合并滤液,定容于250mL,放置2h后,离心沉淀20min。取上层清液1mL按亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法测定吸光度,计算山楂叶中总黄酮含量为4.10。
1.2.3超声波乙醇提取山楂叶中黄酮的方法称取2.0g剪碎的山楂叶于100mL圆底烧瓶中,按一定的料液比加入乙醇提取剂,在搅拌条件下,将圆底烧瓶置于超声波仪中用超声波处理一定时间后过滤,残渣用相应的提取剂洗涤3次,合并滤液,定容于250mL,放置2h后,离心沉淀20min,取上层清液1mL亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法测定吸光度,计算总黄酮提取率。
2结果与讨论
2.1乙醇浓度对黄酮提取率的影响
在常温下,料液比1/25,不同乙醇浓度的条件下,进行超声波处理20min,结果见图1。从图1可知,乙醇浓度在50~70时,有较高的提取率。乙醇浓度大于70以后,黄酮提取率大幅度降低。较高乙醇浓度有利于提高黄酮提取率,但高浓度乙醇使其他醇溶性杂质的溶出增多,有效成分溶出减少。
2.2超声波处理时间对黄酮提取率的影响
在常温下,乙醇浓度60,料液比1/25,搅拌条件下做不同超声波处理时间对黄酮提取率的影响实验。结果如图2,提取时间在15至45min之间提取率随时间的延长而提高,45min后基本达到平衡。
2.3最佳提取条件的确定
为了获得以乙醇作为提取剂时,超声提取山楂叶中黄酮的最佳工艺条件,利用正交法“均衡分散”的特点,以不同的乙醇浓度,不同的处理时间,不同的料液比为主要考察因素,以浸取样品中总黄酮的提取率为主要考察指标,确定最佳提取条件。
表1正交因子水平表
因子乙醇浓度/时间/min料液比(W/V)
水平ABC
150451/25
260301/20
370151/30
按表1的正交因子水平设计L9(34)正交实验,实验设计与结果见表2。
表2正交实验方案及实验结果
因子ABC提取率/
水平
111388.18
212185.29
313268.96
421287.22
522370.25
623165.92
731166.41
832258.12
933357.85
k1242.43241.81217.62
k2223.39213.66214.30
k3182.38192.73217.44
R60.0549.083.30
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