2009生科第5章课件.pptVIP

1、限制性核酸内切酶 2、DNA连接酶 二、核酸基本操作技术 1. CaCl2法制备感受态细胞 2. 电转化法 （三）PCR技术 （2）引物/ Primers RAPD / 随机扩增多态DNA （四）基因组文库 （五）cDNA文库的构建 （六）基因文库的筛选 三、SNP的理论与应用 四、基因克隆技术简介 （一）RACE技术 （二）应用cDNA差示分析法克隆基因 五、蛋白质组与蛋白质组学技术 回文结构： 多克隆位点：（multiple cloning site，MCS） α-互补 质粒的制备流程 ? cDNA文库的构建示意图 蛋白质印迹又称免疫印迹（immunoblotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和定量分析。 (二）蛋白质印迹法 （Western bloting） 蛋白质样品制备 1、蛋白质印迹基本程序 2、蛋白质印迹中用于检测的抗体 3）与生物素偶联的抗体 1）放射性标记的抗体 2）与酶偶联的抗体 1、分子克隆中常用到蓝白斑来筛选重组质粒，其原理和步骤是什么？ 2、用酚抽提DNA时，离心后，为什么变性蛋白质总是会停留在水相和酚相之间？ 3、生产限制性内切酶的细菌如何保护自己的DNA不被降解？ 4、简述以质粒为载体构建基因文库的基本步骤？ 5、基因操作中使用cDNA克隆有哪些优越性？ 6、基因组文库与cDNA文库在构建原理和用途上的主要区别是什么？ 7、概念：载体/克隆载体；分子克隆；SNP；RACE；转化；感受态；基因组文库/cDNA文库；RDA；MCS； α-互补; RAPD; AFLP ？ 9.提取DNA时，异戊醇的作用是：（ ） A. 使蛋白质脱水 B. 使DNA进入水相 C.帮助DNA进入水相 D.减少气泡，促进分相 D 10.关于碱裂解法分离质粒DNA，下面哪种说法不正确（ ） 溶液I的作用是悬浮菌体 溶液II的作用是使DNA变性 溶液III的作用是DNA复性 质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性 D 8、设计聚合酶链反应的引物时，应考虑引物与模板的（ ） A. 5′端特定序列互补 B. 5′端任意序列互补 C. 3′端特定序列互补 D. 3?端任意序列互补 11.用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为（ ） A. 染色体DNA断成了碎片 B.染色体DNA分子量大而不能释放 C. 染色体变性后来不及复性 D. 染色体未同蛋白质分开而沉淀 C 12.当已知目的基因两个末端的部分碱基序列后，一般可用（ ）技术将该基因（DNA）克隆出来。 A. 构建基因文库 B. 聚合酶链反应 C. 转座子标签或T-DNA标签技术 D. 人工合成法 13.关于cDNA的最正确地提法是（ ） A. 同mRNA互补的单链DNA B.同mRNA互补的双链DNA C. 以mRNA为模板合成的双链DNA D. 以上都正确 C 1.7kb 1.6kb 1.4kb 0.9kb 1.2kb 0.9kb 0.5kb 0.4kb 1 2 3 14. 为了绘制长为3.0kb BamHI限制性片段的限制性图谱，分别用EcoRI、HpaII、EcoRI+ HpaII消化这一片段的3个样品。电泳图谱如下图所示。请根据这些结果绘制一个限制性图谱，要标明EcoRI和HpaII识别位点间的相对位置以及它们之间的距离（kb）。 1： Eco RI 2：Hpa II 3：Eco RI+Hpa II 15.限制性核酸内切酶Bam HI和PstI切割某一DNA序列，结果示于下图： 指出被切割DNA分子的5′端和3′端; 如果将切割后的DNA同DNA聚合酶、4种dNTP在一起温育，这些DNA末端会有什么样的变化？ 经过(2)中的反应后,还能用T4 DNA连接酶将Bam HI末端连接起来吗?Pst I末端呢?(T4 DNA连接酶能够连接平末端和粘性末端) （3）中的连接后,能够重新形成Bam HI位点吗？Pst I位点呢？ Thanks you ！ 双链中每一条链均按5′→3′方向阅读，其序列相同。 如：5′CTGCAG3′ 3′GACGTC5′ 含有紧密排列的多个限制性内切酶识别位点