new第4章蛋白质的共价结构题稿.pptVIP

一、蛋白质通论 二、肽 三、蛋白质一级结构的测定 四、蛋白质的氨基酸序列与生物学功能 蛋白质 、多肽、 寡肽 蛋白质与多肽可以通用 有时也以胰岛素（51个氨基酸，MW=5807）作为一个分界线， 大于称为蛋白质，小于为多肽 寡肽通常指2-10个氨基酸的小分子肽 一、蛋白质通论 蛋白质的分类 （三）蛋白质构象和蛋白质结构的组织层次 1、肽的基本概念 一分子氨基酸的α-羧基与另一分子氨基酸α-氨基脱水缩合的化合物叫做肽，氨基酸之间通过酰胺键（蛋白质化学中将这类酰胺键专称为肽键）连接而成。 命名举例 注意： 在开链肽的N端和C端可以有游离的α氨基和α羧基，而有的开链肽的N端或C端的游离的α氨基或α羧基被别的基团结合（如烷基化、酰化等）或N端残基自身环化。 例如促甲状腺素释放激素的N端残基是谷氨酸，此残基易于自身环化成焦谷氨酰基（α氨基与谷氨酸的γ羧基脱水缩和而成）。 1）、谷胱甘肽 γ-肽键 2）、促肾上腺皮质激素（ACTH） 大脑分泌的ACTH参与意识行为的调控； 腺垂体分泌的ACTH主要作用于肾上腺皮质 3）、脑啡肽 Leu-脑啡肽 4）、胰高血糖素 ——29肽 蛋白质的一级结构： 1，样品必需纯（97%以上）； 2，知道蛋白质的分子量； 3，知道蛋白质由几个亚基组成； 4，测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数。 5，测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。 4种常用羧肽酶： -AA-AA-Lys 可以用碘乙酸等烷基化试剂保护生成的半胱氨酸的-SH 由于氨基酸顺序测定多数采用Edman降解法，它一次能分析肽链长度约10余个氨基酸残基，所以分离得到的单链如果太长，须将长的肽链断裂成易分析的较短肽链。 肽链部分降解的方法要求选择性强、裂解点少、反应率高，一般采用化学裂解和酶解法两种。 1）．化学裂解法 溴化氰（CNBr）与肽链中Met残基侧链的硫醚基发生反应，生成环化的溴化亚氨内酯，此产物水解后，产生高丝氨酸内酯，使蛋氨酸羧基端的肽键断裂。 这一方法的优点是产率高（可达85%）、专一性强，故实际应用较多。 2）．酶解法 酶解法相对化学裂解法而言，有许多优点，如专一性强、裂解条件温和、副反应少等，再则蛋白水解酶对肽链的水解率也比较高; 不同的蛋白水解酶对不同氨基酸形成的肽键水解专一性不同。 胰蛋白酶：R1=赖氨酸Lys 和精氨酸Arg 侧链（专一性较强，水解速度快）。 胰凝乳蛋白酶或糜蛋白酶：R1=苯丙氨酸Phe,色氨酸Trp,酪氨酸Tyr（速度快）; 亮氨酸Leu，蛋氨酸Met和组氨酸His水解速度稍慢。 6. 肽段氨基酸序列的测定 主要Edman降解法 现在主要由氨基酸序列推定法 对角线电泳图谱 混合肽段点到滤纸中央，两个方向的电泳条件完全相同 9.蛋白质测序举例 英国Sanger等人在1953年首次完成了牛胰岛素（bovine insulin）的全部化学结构的测定工作——这是一个里程碑性的工作 用重叠肽重建多肽链序列 胰岛素中二硫桥位置的确定 10. 蛋白质序列数据库 四、蛋白质的氨基酸序列与生物学功能 最早的序列分析：胰岛素蛋白质 1.不同物种的系统发育分析 40个物种的细胞色素c中不变残基（28个） 血红蛋白的进化树 + HI + 巯基保护试剂 4.肽链的部分降解及肽片断的分离 甲硫氨酸,人体唯一的含硫必需AA 氰化物，带有氰基（CN）的化合物 cyanide [sai?,naid] 叁键给予氰基以相当高的稳定性，使之在通常的化学反应中都以一个整体存在。 该基团具有和卤素类似的化学性质，常被称为拟卤素。 有机氰化物可分类为腈jīng （C-CN）异腈（C-NC） 苦杏仁中毒机理主要是由于苦杏仁苷被肠道菌群中的β-葡萄糖苷酶水解，产生氢氰酸而被吸收。 氰离子能与细胞色素氧化酶的三价铁（Fe3+）结合，阻断了氧化呼吸过程中电子的传递，致使血红蛋白丧失携氧能力，最后组织细胞因缺氧而窒息。 有报道，成人一次口服生苦杏仁40-60粒可中毒，50-100粒可致死。亦有文献报道，小儿口服5粒引起中毒，服10余粒致死的。 产生片段的C端是Met 广泛使用 胰蛋白酶 胰凝乳(糜)蛋白酶 葡萄球菌V8蛋白酶 胃蛋白酶 溴化氰 梭菌蛋白酶（Arg蛋白酶） pH2-3 Arg(C) 胰蛋白酶 肽链 水解位点 肽链 水解位点 5、肽段的分离提纯 肽链经部分裂解得到肽片段必须分离提纯，才能进一步测定其氨基酸顺序。 先采用凝胶过滤，得到不同相对分子质量的肽片段组分 肽片段组分可用离子交换层析进一步提纯，也可应用双相高压纸电泳和层析相