2009 3 28 蛋白质分离纯化技术.ppt

蛋白质分离纯化 2009-3-28 蛋白质的酸碱性质 蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定pH的溶液中都可解离成带负电荷或正电荷的基团。 蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。 蛋白质的胶体性质 蛋白质属于生物大分子之一，分子量范围可达1万至100万之间，其分子的直径在1~100 nm，为胶粒范围之内。 蛋白质胶体稳定的因素 颗粒表面电荷（双电层） 水化膜 蛋白质分离纯化的一般原则 总目标：增加蛋白制品的纯度或比活 1.前处理(pretreatment)：因动/植物/细菌而异 2.粗分级分离(rough fractionation)：采用盐析/等电点沉淀/有机溶剂分级分离等方法 3.细分级分离(fine frationation)：采用凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等 4.结晶：分离纯化的最后步骤 蛋白质的分离纯化方法 根据蛋白质分子大小的差异分离—透析和超滤 根据蛋白质的溶解度差异分离—沉淀、盐析等 根据蛋白质的电荷差异分离—电泳、离子交换等 根据蛋白质与某些物质的吸附差异—吸附分离 利用生物分子专一性结合的特性—亲和层析 透析（dialysis） 原理：利用蛋白质分子不能