2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体定稿版教程范本.ppt

二、单克隆抗体的应用 (1)作为诊断试剂： 在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点. 单克隆抗体制备过程(分析) ①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？ 刺激B淋巴细胞产生相应的抗体 ②细胞融合后有几种细胞？ BB;BG;GG B G 注意：BG杂交瘤细胞也是一 个系列(B1G,B2G---BnG) 注意:B淋巴细胞是一个系列(B1,B2,B3,---Bn） 单克隆抗体制备过程(分析) ③如何筛选出杂交瘤细胞？ ④杂交瘤细胞的特点？ 用特定的选择培养基 既能产生特异性抗体，又能大量增殖 (只有杂交瘤细胞才能存活) 单克隆抗体制备过程(分析) ③如何筛选出杂交瘤细胞？ ④杂交瘤细胞的特点？ 用特定的选择培养基 既能产生特异性抗体，又能大量增殖 (只有杂交瘤细胞才能存活) 单克隆抗体制备过程(分析) ⑤是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？ 不是 ⑥如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？ 利用多孔板法和抗原—抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。 方法——抗原-抗体杂交法 阳性孔 单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。 单抗 放射性同位素 * 1.学习目标 理解动物细胞融合的过程和原理； 了解动物细胞融合的应用； 理解动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同 2.学习重点 动物细胞融合的原理 3.学习难点 动物细胞融合的原理 (第1课时) 将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。 一. 植物体细胞的杂交技术 1、植物体细胞杂交技术概念 2、理论基础（原理）： 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 酶解法：纤维素酶和果胶酶 3、去除细胞壁的方法： 温故知新 4、人工诱导融合的方法： 物理法： 离心、振动、电激， 化学法： 聚乙二醇（PEG ） 5、融合完成的标志： 再生出细胞壁 6、①杂种植株的特征： 具备两种植物的遗传特征，原因是杂种植株中含有两种植物的遗传物质。 ②体细胞杂交即两个细胞融合成一个细胞，不管染色体数，还是染色体组数都采用直接相加的方法。 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 正在融合的原生质体 再生出细胞壁(融合成功的标志) 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 纤维素酶 果胶酶 物理方法 化学方法： 离心 振动 电刺激 聚乙二醇 细胞分裂 植物组织培养 植物细胞融合 酶解法 人工诱导方法 7.植物体细胞杂交的过程 去细胞壁 8、意义： 克服了远缘杂交不亲和的障碍 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 自学指导： 阅读P52中“动物细胞融合和单克隆抗体”的内容，思考下列问题: (2分钟) 1、动物细胞融合的概念是什么？该技术实施的原理是什么？ 2、灭活病毒诱导细胞融合的原理？ 3、动物细胞融合技术的应用有哪些？ 二. 动物细胞融合 1.概念： 动物细胞融合(cell fusion)也称为细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2、原理： 细胞膜的流动性 ◆杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞 细胞融合是正常的生命活动。 两个细胞正在融合 受精作用 正在融合的 淋巴细胞与骨髓瘤细胞 正在融合的鸡血细胞 3.动物细胞融合的过程 3.动物细胞融合的过程(分析) ①常用的诱导因素(方法) 物理法： 化学法： 生物法： 离心、震动、电激等 聚乙二醇(PEG) 灭活的病毒 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞融合、形成杂种细胞 ②灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。 为什么灭活的病毒能作诱导剂？ 灭活的病毒丧失感染性 保留融合活性 3.动物细胞融合的过程(分析) 3.动物细胞融合的过程(分析) ③融合后细胞的类型: AA、AB、BB A B ④AB杂种细胞遗传物质有什么特点？ 含两种生物的遗传物质 比较植物体细胞杂交和动物细胞融合 用 途 诱导方法 融合前处理 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学方法 物理、化学、 生物方法 获得杂种植株 主要用于制备 单克隆抗体 ⑴突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能； ⑵为制造单克隆抗体开辟了新途径 4、