时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)操作.docVIP

时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)是在荧光分析的基础上发展起来的一种特殊的荧光分析。它利用具有长效荧光的稀土金属（Eu、Tb、Sm、Dy）作标记物，充分利用激发光与发射光之间的降移与发射光较长的半寿期，在激发光后延时测量发射光的强度。从而所测的荧光不受激发光和被检物中的非特异荧光干扰，提高了检测的特异性与灵敏度。在激发光后延时400微秒，测量400微秒，间歇200微秒后进入下一个测量周期，每一个周期为1000微秒。对每一个样品实施1秒钟的测量，意味着完成了1000个周期的测量，测量精确度极高。　 （一）Auto DELFIA自动时间分辨荧光免疫分析仪 开/关程序 1 开机 1.1 依次打开样品处理器电源，微孔板处理器电源，打印机电源。 1.2 打开计算机显示器。 1.3 启动计算机。 1.4 运行系统软件： Auto DELFIA与Multicalc系统软件在Windows启动后自动运行。Auto DELFIA workstation软件用于控制Auto DELFIA的运行，MultiCalc的主要功能是与主机通讯，对测试结果进行评估和对质控及其他数据处理（可通过双击屏幕上图标不运行）。在MultiCalc Auto DELFIA环境下，只有键盘有效，鼠标无效。 2 开机后准备 1.1 清洗液准备 1.1.1 微孔板处理器洗液（250ml浓缩液＋600ml去离子水混合），每做一块板至少1升用量，洗液在密闭条件可保存2周时间。 1.1.2 准备样品处理器洗液（50ml浓缩液＋5000ml去离子水混合），每做一块板至少需要800ml洗液，洗液在密闭条件下可保存1周时间。 1.2 样品处理器准备 1.2.1 在Wash bottle（清洗液瓶）、Rinse bottle (冲洗液瓶)分别注入足够用量的清洗液和去离子水，倒空废液瓶。拧紧各瓶盖，确保废液瓶管路向下。 1.2.2 如样品需要稀释，放入稀释杯和稀释液。系统安装时已调好有71ml和190ml两种规格的稀释杯，若使用71ml的稀释杯，从最右端开始放置，如有预处理样品，则不能使用190ml的稀释杯。不能使用多个稀释杯。 1.3 微孔板处理器准备。 1.4 点击Load菜单下的Load System Liquids选项Option-Show Tempareture显示温度和压力。当管路内有压力时，不要打开瓶盖。 1.5 点击Maintenance → Plate Processor → Washer test，检查洗板机功能，系统自动提示检查步骤。 1.6 在试剂舱内插入足量干净、不弯曲的吸嘴。 1.7 装载足量干净的稀释杯，每一稀释杯分为两半，可做两次稀释，总共有24个稀释位。 1.8 检查检测帽（白色）是否放入试剂舱最左边第一个帽架位置，并且其他位置没有黑色防蒸发帽。 1.9 确认传送器下方的废物盘已倒空。 1.10 检查两瓶增强液是否足够（一瓶可做8块板），通常先换右边的瓶子，但如左边瓶内溶液少于1/3，则两瓶均须更换。增强液瓶内有压力，必须拧紧盖子。必要时使用Maintenance菜单下的 Enhancement solution flush 命令灌注管路。 1.11 校准品：每瓶hAFP和βhCG校准品瓶中精确加1.1ml去离子水，轻轻混匀，30min后去除泡沫使用。需再次使用的校准品保存于-20℃。 1.12 Eu/Sm标记物溶液：在使用前1h，根据每条板条（12孔）需30μl标记物和30ml缓液配制标记物溶液。 3 关机 3.1 关闭微孔板处理器电源。 3.2 用探针支架支撑探针架防止损坏，关闭样品处理器电源。 3.3 退出Auto DELFIA系统软件，退出MultiCalc软件。退出Windows。 3.4 关闭电脑电源。 （二）Auto DELFIA自动时间分辨荧光免疫分析仪 分析参数设置程序 1 检验项目设置 1.1 在操作主界面点击Settings菜单 → 选择Assay Protocols（检验项目）。 1.2根据需要选择校准曲线、样品复管数、批号和质控。使用新批号试剂时，则更新批号。如果选择了参考曲线，批号改变后系统自动提示需做一条新的曲线。 1.3 若欲将结果存到LIS系统中，确认在MultiCalc中Protocol的 Stored Files里选择Results，并选择Resulte格式。 1.4 如果要做双标，须先做溢出纠正因子校正（详见维护保养部分）。 1.5 如果做新生儿筛查，在Settings菜单系统子菜单下选择新生儿筛查。 编辑检验项目、校准和质控。 1．在主界面鼠标点击Settings菜单，选择Assay protocols → 如 Screening → AFP-BHCG