如何选择紫外分光光度计？.docVIP

如何选择紫外分光光度计？ 主要考虑光学构造、光谱范围、样品类型和分析工具。 研究者们有众多的新紫外光分光光度计可选。自从60年前紫外分光光度计出现在实验室的工作台之后，已经形成了一种能解决广泛难题的仪器，从单一波长的测量到高性能多光谱的测量分析。科学家们选择时需要根据自己实验室的需要和目的用途来考虑，光学构造和光源、探测方法、样品类型和数据处理等都是要考虑的因素。 光学构造（OPTICAL CONFIGURATION）一般来说，紫外光分光光度计分为单光束和双光束两类。顾名思义，单光束型主要是依赖单束光进行测量。一束给定波长的光通过对照物，然后再通过实际样品溶液，就能得到吸光结果。 双光束型则是通过一个斩光轮（mirrored chopper wheel）将一束光分成两束，分别测量对照样品和实际样品。可以最小化光漂移（lamp drift）和减少测量时间。一些双光型光度计不利用斩光轮，而是利用一种光束分光器来代替，将一束光分成两束平行的光然后同时测量对照样品和目的样品。因为增加了测量的速度，所以双光束分光光度计在测量一些溶液随时间动态变化的研究中大有用处。 光源和检测方法（LIGHT SOURCES AND DETECTION）分光光度计的光谱也是需要考虑的一个重要因素。实验室研究人员希望省钱购入专门仪器定量核酸、蛋白或者细菌的生长情况。例如Amersham Biosciences of Piscataway公司的GeneQuant II能在230、260、280、320、595和600nm的波长下测量样品。果果需要更大的灵活性，研究者可以考虑一种更高性能的宽光谱仪器，可以程序性地进行ELISAs分析和比色分析。 紫外分光光度计一般覆盖190nm和380nm波长，通常利用氘灯照明。一些特殊的仪器可以提供满足光子学和半导体研究需要的光谱范围。 Varian of Palo Alto公司的Cary Deep UV和Hitachi High Technologies of Tokyo的U-7000 Automated Vacuum UV System就是这样的仪器。 一些仪器具有多种光源供选择：紫外光、可见光和甚至红外光（780 nm 至3,000 nm）。钨灯和卤素灯一般只覆盖可见光部分（大约380 nm 到800 nm）。而氙灯则可以覆盖紫外光和可见光区域。 分光光度计的带宽（bandwidth）很大程度上依赖于单色仪的狭缝的宽度。可以投射出实验精确要求的光谱。一种严格带宽使得仪器能对复杂的混合物进行高分辨率的吸光测量。可变的单色仪的狭缝宽度能使一台分光光度计满足多种实验需要。 为了测量吸光值，分光光度计制造商通常使用光电倍增管（photo-multiplier tubes，PMTs）和光敏二极管。PMTs提供快速的反应时间和良好的灵敏度，并且可以在紫外光谱调节至特定的范围。但一些制造商依赖于光敏二极管的动态范围在数秒内行使所有的光谱测量。 样品类型（SAMPLE FORMAT）在大部分的样品类型中，分光光度计可接受样品孔、小玻璃管cuvette、吸浆管和微孔板。微孔板主要是满足高通量的需要和大规模的实验室需求。但尽管对于小实验室来说，制造商仍然提供了多种容器转换器来满足通量的要求和减少实验时间。 用小试管cuvette装样品容量一般从1 μl-5ml，并且一些仪器装备了各种样品固定物来满足各种改变需要。体现了柔韧性。 数据管理（DATA MANAGEMENT）大部分单机型的分光光度计包含了驱动仪器运行和管理数据的软件。高性能的仪器，通常与PC机一起联用，需要从制造商提供额外的软件。同时用户也可以选择升级软件以满足他们的需要。 另外一个值得考虑的因素是数据的最终使用。各独立实验室都有各自感兴趣的实验结果。例如一些药物机构需要考虑美国FDA的要求和欧联盟的药物评价机构的要求选择不同的数据处理方式。 紫外可见分光光度计常见故障的排除 光源部分：（1）故障：钨灯不亮；原因：钨灯灯丝烧断（此种原因几率最高）；检查：钨灯两端有工作电压，但灯不亮；取下钨灯用万用表电阻档检测。处置：更换新钨灯；（2）故障：钨灯不亮；原因：没有点灯电压；检查：保险丝被熔断；处置：更换保险丝，（如更换后再次烧断则要检查供电电路）；（3）故障：氘灯不亮；原因：氘灯寿命到期（此种原因几率最高）；检查：灯丝电压、阳极电压均有，灯丝也可能未断（可看到灯丝发红）；处置：更换氘灯；（4）故障：氘灯不亮；原因：氘灯起辉电路故障；检查：氘灯在起辉的过程中，一般是灯丝先要预热数秒钟，然后灯的阳极与阴极间才可起辉放电，如果灯在起辉的开始瞬间灯内闪动一下或连续闪动，并且更换新的氘灯后依然如此，有可能是起辉电路有故障，灯电流调整用的大功率晶体管损坏的