HPLC日常使用与维护介绍.ppt

Page ? * 一、 要求与注意事项 流动相的pH值应控制在2~8之间 温度通常不超过40 ℃ 反相色谱系统的流动相首选甲醇-水系统，采用紫外末端波长检测时，首选乙腈-水系统 流动相的配制 流动相贮存 新鲜超纯水 过0. 45um滤膜 偏差士0.2pH 脱气 玻璃 聚四氟乙烯 盖严 冰箱冷藏 3天内使用完 冲洗(使用缓冲液或盐的反相色谱柱) 80水：20乙腈 50水：50乙腈 20水：80乙腈 色谱柱的长期保存 反相柱：甲醇或乙腈 正相柱：脱水正己烷 离子交换柱：5%甲醇或0.05%叠氮化钠 色谱柱的维修 ①色谱柱出入口颠倒，10~20倍柱体积流动相冲洗 柱压突然变大 ②更换新滤片(柱入口过滤片堵塞) 峰形变坏(肩峰或双峰) 同型号填料和流动相配成匀浆，将塌陷处填平(柱入口柱床可能有塌陷) 色谱柱的再生 正相柱 正己烷 二氯甲烷 异丙醇 二氯甲烷 正己烷 干燥正己烷平衡 反相柱 蒸馏水 甲醇 二氯甲烷 甲醇 蒸馏水 流动相平衡 离子交换柱 稀酸缓冲液 阳离子交换柱 稀碱缓冲液 阴离子交换柱 氨基柱 0.02mmol/L磺酸 蒸馏水平衡 二、常见问题及其解决方法 柱压变化的原因及解决方法 基线噪声较大和对策 基线漂移的原因及解决方法 保留时间漂移的原因及其解决方法 异常峰形及其分析 柱压变化的原因及解决方法 出现情况 原因 解决方法 ? ? ? 柱压高于正常值 色谱柱被堵塞、流速设定不正确、系统压力零点飘移 更换新的色谱柱、重新设定正确流量、调节压力传感器的零点 进样器、柱端过滤器、管路或连接口堵塞 拆下过滤器用稀硝酸、更换被堵塞管路或按说明书方法进行清洗 流动相配比不正确 重新设定配比 长期使用柱端固定相板结 挖掉板结部分修补柱端 分析生化、染料等易污染固定相的样品 方法同上，采用保护柱 ? ? 柱压低于正常值 某连接处泄露 打高压30 000 kPa查找泄露处，拆下柱子加适当力拧紧或衬四氟薄膜 泵里进空气 打开Purge阀，用3-5 mL/min的流速冲洗 没有流动相流出 检查储液瓶中有无流动相、沉子是否浸没在流动相中、泵是否运行 参比阀未关闭 将流速降低后关闭参比阀，一般降至0.1~0.2 mL/min后关闭参比阀 基线噪声较大和对策 原因 解决方法 氘灯未预热 预热30min以上 氘灯用的过久 更换新的氘灯 流路中有气泡 打开Purge阀，用3-5 mL/min的流速冲洗 基线漂移的原因及解决方法 原因 解决方法 柱温波动 控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱 流通池被污染或有气体 用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池断开柱子，如有需要，可以用1 mol/L的硝酸冲洗 紫外灯能量不足 更换新的紫外灯 流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂 样品中有强保留的物质高K值)以馒头峰样 使用保护柱，如有必要，在进样之前;在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子 检测器没有设定在最大吸收波长处 将波长调整至最大吸收波长 流动相的pH值没有调节好 加适量的酸或碱调至最佳pH值，对于硅胶基质的填料，其所能承受的流动相约范围为1-8 Page ? *