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分子生物学复习提纲 一、名词解释(共5小题，每小题2分，共10分) 1、cDNA文库以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。 2、某一特定来源DNA通过细胞－DNA克隆技术构建成含有所用DNA片段的重组DNA分子，并转化至细菌内，构成DNA文库。依据DNA的来源不同，可分为，基因组DNA文库和cDNA文库。CDNA文库：是这样一个克隆群，它包含了一种生物的基因组的全部基因的cDNA序列。 3、蛋白质组 4、基因 5、PCR 6、基因多态性 7、基因组8、启动子9、细胞凋亡 10、RNAi11、基因突变是指基因组DNA分子发生的突然的可遗传的变异DNA分子中发生碱基对的增添、缺失或替换，而引起的基因结构的改变12、 13、信号转导 15、细胞周期 16、中心法则 简答题 1、根据被测定的对象，简述分子杂交印迹的种类及其特点、应用上优缺点1）、DNA印迹法RNA印迹法2）、RNase 无处不在，要绝对消除外源RNase的污染。 不能采用碱变性，只能采用甲醛、乙二醛、二甲基亚砜等变性。 可以用于定性或定量分析组织细胞内的总RNA或某一种特异RNA，特别是分析mRNA的长度和含量。、蛋白质印迹法 也是由电泳分离、转移固定和检测分析等组成。 只能用电转移法进行转移。 用抗原-抗体反应检测目的蛋白2、简述PCR引物设计原则’端不能互补以免形成引物二聚体 ； ④引物3’端不能修饰。（原因：3’端是延伸的起点，决定扩增的效率和特异性，要求严格配对，特别是末端的两个碱基，最好是G/C。不过，引物3’端不应有三个连续的G/C。） ⑤引物5’端可以修饰。 4）、引物特异性。引物与目的DNA扩增区以外序列（非特异扩增序列）的同源性不应超过70%。 5）、引物浓度。一般为0.1-1μmol∕L。 6）、引物质量。需要纯化，一般采用聚丙烯酰胺凝胶电泳或反向高效液相层析进行纯化。（原因：化学合成的引物中可能含有错误序列，这些序列会引起非特异性扩增） 3、试述研究蛋白质组学的方法及意义1、方法：以蛋白质组为研究对象，从整体、动态和网络水平上对蛋白质进行研究。 2、意义：①蛋白质组研究是寻找疾病分子标记最有效的方法。②为探索肿瘤、老年痴呆症等疾病的发生机制提供了新的方法。③对病原微生物进行蛋白质组学分析，寻找致病因子并研制疫苗。④推动新药的开发。⑤蛋白质组研究不仅可以实现与基因组的衔接和确认，解读基因组天书，直接揭示生命活动的规律和本质；更可以研究人类重大疾患或病原体致病的物质基础以及发生和发展的病理机制。 4、试述人类基因组计划的主要内容及意义“功能基因组时代”的到来。功能基因组学研究基因结构，阐明所有基因产物的功能，研究基因表达的调控机制并绘制基因表达调控的网络图，在基因组水平上揭示生命的起源和进化。?人类疾病相关的基因是人类基因组中结构和功能完整性至关重要的信息。对于单基因病，采用“定位克隆”和“定位候选克隆”的全新思路，导致了亨廷顿舞蹈病、遗传性结肠癌和乳腺癌等一大批单基因遗传病致病基因的发现，为这些疾病的基因诊断和基因治疗奠定了基础。对于心血管疾病、肿瘤、糖尿病、神经精神类疾病（老年性痴呆、精神分裂症）、自身 5、原癌基因、癌基因、抑癌基因与细胞周期、细胞凋亡调控基因的关系1.原癌基因：1、ras基因——一些生长因子如EGF和胰岛素可通过RTK（蛋白酪氨酸激酶受体）激活Ras蛋白，另一些生长因子如IL-2、3、5的受体无蛋白酪氨酸激酶活性，则通过激活PTK（细胞质基质蛋白酪氨酸激酶）而激活Ras蛋白。激活的Ras蛋白通过激活Raf和PI-3K途径调控细胞增殖和凋亡。 2、myc——Myc蛋白的N端含转录激活域。Myc蛋白参与正常细胞增殖、转化和分化的调控。高水平的Myc蛋白可以加速细胞生长。 3、bcl-2?一些原癌基因产物就是Cyclin?一些原癌基因产物诱导Cyclin表达一些原癌基因产物调节CDK活性一些原癌基因产物是Cyclin，CDK底物 ?2.癌基因： ? ? 3.抑癌基因：1、Rb——在G1期，蛋白是细胞周期抑制信号的集合点，低磷酸化的Rb蛋白阻止细胞G1/S期和G2/M期的过渡，从而抑制细胞分裂增殖。Rb蛋白通过对转录因子E2F的作用来调控细胞增殖和分化。2、p53——野生型p53蛋白在维持细胞正常生长、抑制恶性增殖过程中起重要作用。促进DNA修复。3、p16蛋白既是细胞周期的有效调控者，又是抑制肿瘤细胞生长的关键因子。抑制CDK4，使Rb蛋白保持低磷酸化，抑制细胞从G1期向S期的过渡，从而抑制细胞