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复合酶法提取金针菇多糖及光谱分析 摘要：研究了复合酶法提取金针菇（ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ）多糖的最佳工艺条件，并对金针菇多糖进行了光谱分析。采用木瓜蛋白酶、纤维素酶复合处理，对加酶质量比、酶解温度、ｐｈ、酶解时间4个因素对多糖提取率的影响进行了正交试验。确定了复合酶法提取金针菇多糖的最佳工艺条件为酶解温度６０ ℃，复合酶添加量０．５％，加酶质量比（木瓜蛋白酶∶纤维素酶）２∶１，ｐｈ ６．０，酶解时间２ ｈ，此条件下多糖提取率可达９．１％。 关键词：金针菇（ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ）多糖；复合酶法提取；正交试验；光谱分析 combined-enzyme extraction and spectral analysis of flammulina velutipes polysaccharides liang mina,zou dong-huib,guo hong-wenb, li angb （ａ． ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ； ｂ． ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ ｆｏｏｄ ａｎｄ ｂｉｏ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ｑｉｑｉｈａｒ uｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ｑｉｑｉｈａｒ １６１００６， ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ， ｃｈｉｎａ） ａｂｓｔｒａｃｔ： ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ ｂｙ ｃｏｍｂｉｎｅｄ－ｅｎｚｙｍｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ． ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｄｏｓｅ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｓｅ ａｎｄ ｐａｐａｉｎ， ｐｈ， ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｉｍｅ ｗere ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ test． ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ６０ ℃； mａｓｓ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｅｎｚｙｍｅ， ０.５％； aｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｐａｐａｉｎ ｔｏ ｃｅｌｌｕｌａｓｅ， ２∶１； ｐｈ， ６．０； rｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， ２ ｈ． ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｗａｓ ｕｐ ｔｏ ９．１％ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ． ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ； ｃｏｍｂｉｎｅｄ－ｅｎｚｙｍｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ； ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ； ｓｐｅｃｔｒａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ 金针菇（ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ）又名冬菇、朴菇、构菌、青杠菌、毛柄金钱菌，隶属担子菌亚门（ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔｉｎａ）层菌纲（ｈｙｍｅｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）伞菌目（ａｇａｒｉｃａｌｅｓ）口蘑科（ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａｔａｃｅａｅ）金钱菌属（ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ）。金针菇菌盖滑嫩、菌柄细长脆嫩、形美、味鲜，是世界上著名的食药两用菌和观赏菌［１］，具有较高的营养价值和药用价值，有广阔的开发前景。 金针菇子实体中除含有蛋白质、氨基酸、矿物质、维生素和对人体有益的微量元素外还含有一种重要的生物活性高分子多糖，金针菇多糖由于具有抑制肿瘤、抗癌、增强肌体免疫力［２－４］等作用而受到广泛重视。如何提高金针菇多糖的提取率、降低成本已成为拓展金针菇使用范围、提高其应用价值的关键。 传统的浸提法虽然是提取多糖的经典方法，但时间长、效率低、能耗大；金针菇多糖通常被包裹在植物细胞壁内，并且多糖往往和蛋白质结合在一起，以蛋白质多糖的形式存在。研究表明中性蛋白酶能有效酶解与多糖结合在一起的蛋白质，从而将多糖释放出来而提高多糖提取率，同时降低了多糖中蛋白质的含量，提高了多糖的纯度［５］。复合酶法处理可以提高多糖提取率、减少能源消耗、缩短提取时间。因此，探索更为高效、经济、可靠的提取方法对金针菇多糖的研究开发具有重要的现实意义。 １ 材料与方法 １．１ 材料 １．１．１ 原料 取市售新鲜金针菇，除去根部，清洗切块，粉碎，干燥，过４０、６０、８０、１００目筛，过筛之后把各级金针菇干粉分别装到清洁干燥的烧杯中，置于真空干燥箱中待用。 1.1.2 试剂 苯酚，天津市科密欧化学试剂开发中心；葡萄糖，天津市凯通化学试剂有限公司；ｓｅｐｈａｄｅｘ ｇ－７５色谱柱，ｐｈａｒｍａｃｉａ公司；纤