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四、培养基的制备 （一）背景知识介绍 细菌和其它生物体一样，在进行培养增殖的过程中，需要一个营养丰富、环境条件适宜的场所。培养基是由适合于细菌生长繁殖的营养物质配制而成的营养基质。制备培养基的目的在于给细菌创造良好的营养条件。由于细菌具有不同的类型，人们对细菌的研究目的也不同，应配制适合不同细菌生长以及按实验要求设计的不同培养基。但从营养角度分析，培养基一般均应含有满足细菌生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐类等。另外，培养基还应具有适宜的酸碱度（pH值）和一定的缓冲能力。 1.培养基的类型 由于培养基名目繁多，种类各异。一般按培养基的成分、培养基的外观状态、培养基的功能把培养基分为不同的类型。 按培养基成分的了解可分为： （1）天然培养基：（基本培养基）是指利用动、植物或其提取物制成的培养基，例如，培养细菌的肉膏蛋白胨培养基、培养酵母菌的麦芽汁培养基等。此种培养基取材方便、营养丰富、种类多样、配制方便。但是其中的成分不甚清楚，不利于做精确的科学实验。我们的实验常使用此类培养基。 （2）组合培养基：（合成培养基）是指用多种高纯化学试剂配制成的、各成分的量都确切知道的培养基。例如培养细菌的葡萄糖铵盐培养基；培养放线菌的淀粉硝酸盐培养基。此培养基价格较贵，配制较烦琐，有利于做精确的科学实验。我们的实验一般都不用。 （3）半合成培养基：是在天然培养基中加入少量已知的化学物质配制而成的。如培养细菌的牛肉膏蛋白胨培养基。 按培养基外观的物理状态，可分为： （1）固体培养基：在液体培养基中加入1％～2％琼脂作凝固剂，就可以制成遇热可融化、冷却可凝固的固体培养基。琼脂又名洋菜，其熔点是96℃，凝点是40℃，所以在一般细菌培养温度下呈固体状态。固体培养基在微生物的科研和实验中，具有极其广泛的用途，如菌种的分离鉴定、菌落计数、菌种的保存等。前面的细菌实验研究中，我们主要用此培养基。 （2）液体培养基：是指未加凝固剂、呈液态的培养基。其组成成分均匀，细菌能充分接触和利用养料，适宜作生理研究用。 （3）半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％～0.5％的琼脂制成的培养基，可用于观察细菌的运动。 按培养基的特殊用途可分为： （1）加富培养基：是指在培养基中加入人血、血清、动植物组织提取液，培养要求比较苛刻的细菌。 （2）选择培养基：根据某一种微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学条件的抗性设计的培养基。利用这种培养基可以将所需的微生物从混杂的微生物中分离出来。如根据某菌对碳源、氮源等营养物质的特殊要求设计的培养基，可以分离到能分解某些物质的微生物；在培养基中加入某种化学物质，可以抑制不需要的微生物生长繁殖，如青霉素、四环素、链霉素能抑制细菌和放线菌的生长，结晶紫抑制革兰氏阳性细菌的生长等。选择培养的理化因素有温度、氧气、pH值等。 （3）鉴别培养基：是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。 2.配制培养基的注意事项 首先应注意营养成分的配比要恰当。我们一般按照培养基的配方进行配制即可；其二要注意控制培养条件。各类微生物所要求的pH值不同，细菌生长所需pH值在中性或微碱性（pH在7.0～7.5）。由于微生物代谢引起培养基酸碱度的变化，往往会造成对生长的抑制。因此，为了保持培养基pH值的相对稳定，要在培养基中加入一些缓冲剂，由K2HPO4和KH2PO4组成的混合物是常用的缓冲剂。其三配制培养基时注意营养物质要有适合的浓度。浓度太低时不能满足生长需要；太高由于渗透压太大，也能抑制生长。 3.配制培养基的过程 称量→溶化→调节pH值→过滤→分装→塞棉塞和包扎→灭菌。 （1）称量：按照培养基配方，准确称取各成分放入烧杯中。有些原料用量少，不易称量，可先配成高浓度溶液，再按比例换算后，取一定量加入烧杯中。 （2）溶化：加入所需要的水量搅匀，然后加热使其溶解。有些原料不易溶解，如蛋白胨、牛肉膏等，可先在小容器中加水少许，加热溶解后倒入烧杯中。配制固体培养基时，在琼脂熔化过程中要不断搅拌，并控制火力，防止培养基溢出或烧焦。当培养基完全熔化后要补足水分。 （3）调酸碱度（pH值）：先用pH试纸进行比色。如果偏酸或偏碱，可用10％HCI和10％NaOH调整pH值至所需范围。 （4）过滤：培养基中有些成分没完全溶解，则需过滤。常用滤纸、纱布（叠成6层）或纱布间加脱脂棉花过滤。加琼脂的培养基要趁热过滤。 （5）分装：根据需要将培养基分装各种不同的容器中。固体培养基都要趁热分装，各容器的量如下： 三角瓶：一般不超过1/2；试管：视需要而定，若制斜面一般装管高的1/5或1/4；倒平板一般是用时再倒。 分装时应避免培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞而引起污染。 （6）塞棉塞和包扎：分装后试管口及瓶口都要塞好棉塞。做棉塞用普通棉花，其形状