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基因工程例题 5.(2011·苏州模拟)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 (1)如图甲，获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性核酸内切酶作用于图中的_________处，DNA连接酶作用于处 ______(填“a”或“b”)。 (2)将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和______法。 (3)由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用______技术，该技术的核心是________。 (4)为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的_____作探针进行分子杂交检测，又要用____的方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 (5)如图乙是该耐盐基因表达过程中的一个阶段，图中3和4的核苷酸种类是否相同？______。说明理由：_________。 【解析】(1)限制酶能将特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，而DNA连接酶能恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。因此，二者都作用于a处。 (2)将基因表达载体导入植物细胞常用农杆菌转化法和基因枪法。 (3)植物组织培养技术是将目的基因导入受体细胞后培养成植株需要用到的技术，该技术的核心是脱分化和再分化。 (4)基因工程的检测包括目的基因是否导入受体细胞的检测和目的基因是否表达成功的检测。 (5)图乙表示的是转录过程，3所在的是转录产物——RNA，其基本组成单位是核糖核苷酸，4所在的是DNA的一条链，其基本组成单位是脱氧核糖核苷酸。 答案：(1)a a (2)基因枪　 (3)植物组织培养 脱分化(去分化)和再分化 (4)耐盐基因(目的基因) 一定浓度盐水浇灌(移植到盐碱地中) (5)不同 3是核糖核苷酸，4是脱氧核糖核苷酸 【例证1】(2011·盐城模拟)限制酶是一种核酸切割酶，可识别并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。如图为四种限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ以及BglⅡ识别序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列是什么 A.BamHⅠ和EcoRⅠ 末端互补序列AATT- B.BamHⅠ和HindⅢ 末端互补序列GATC- C.EcoRⅠ和HindⅢ 末端互补序列AATT- D.BamHⅠ和BglⅡ 末端互补序列GATC- 【解题关键】明确限制酶的作用特点、准确写出四种限制酶切割后形成的黏性末端,只有两种序列的碱基能够互补配对才能使两个DNA片段互补黏合。 选D。各种限制酶切割形成的黏性末端如下表： 由上表可知，BamHⅠ和BglⅡ切出的黏性末端碱基互补配对，末端互补序列为GATC-。 【互动探究】(1)上述不同限制酶具有不同的识别序列，说明限制酶具有什么特点？ 提示：酶具有专一性。 (2)DNA连接酶连接的是互补碱基之间的氢键吗？ 提示：不是。DNA连接酶连接的是两个核苷酸之间的脱氧核糖和磷酸，形成磷酸二酯键，而不是连接互补碱基之间的氢键。 【例证2】(2010·江苏高考)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： (1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有______个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越______。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是________。 (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入______酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了___________。 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在____的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。 【精讲精析】 (1)该质粒为环状DNA，经SmaⅠ切割前，不含有游离的磷酸基团，经SmaⅠ切割后形成平末端，含有2个游离的磷酸基团。 (2)SmaⅠ识别的是CCCGGG序列，在C与G之间切割，SmaⅠ酶切位点越多，也就是C-G碱基对越多，C与G之间的氢键(3个)比A与T之间的氢键(2个)数量多，其含量越多，质粒的热稳定性越高。 (3)据图1可知，SmaⅠ切割位点在抗生素抗性基因(标记基因)中，据图2可知，SmaⅠ切割位点在目的基因中，因此使用SmaⅠ切割会破坏质粒的抗性基因、外源