氨基酸期末概论.docVIP

噬菌体与杂菌的防治 发酵工业中存在噬菌体和杂菌的污染，其产生的危害P113 ①噬菌体会使产生菌的菌体发生自溶而危害生产。 ②其他杂菌或消耗大量营养，破坏原有营养条件，导致生产菌营养不足。 ③产生代谢产物改变环境的理化条件，抑制生产菌形成产物。 ④破坏发酵产物或将其当营养消耗而造成目的产物损失。 ⑤污染直接影响发酵产物的产量，甚至导致倒灌而一无所获。污染还会使发酵液难于过滤杂质而影响产品质量。 并灌法：即将其它灌批发酵16~18h的发酵液，以等体积混合后分别发酵，利用其活力旺盛的种子，不进行加热灭菌，亦不需另行补种，便可正常发酵。 噬菌体污染的异常现象：“二高三低”即pH高、残糖高；OD值低、温度低、谷氨酸产量低。 1.二级种子0~3h：泡沫大、pH高，种子基本不长；6h以后感染噬菌体，泡沫多、pH偏高，种子生长较差；轻度感染或后期感染常看不出异常变化，可用快速检测法，半小时就能确定是否污染噬菌体。甚至8~9h感染，即产生OD值不长、pH上升、泡沫大、耗糖慢、不产酸等典型噬菌体污染现象。 2.发酵前期（0~12h）污染噬菌体：①吸光度开始上升后下降、不升或回降，甚至4~8h内OD值竟然下降到零以下。②pH足渐上升，升到8.0以上，不在下降；排气CO2一反常态，CO2迅速下降，相继出现OD值下跌、pH上升、耗糖慢等异常现象。③耗糖缓慢或停止，也有时出现睡眠病现象，发酵缓慢，周期长，提取困难。④产生大量泡沫；发酵液黏度大，可拔丝；发酵液发红、发灰；有刺激性气味。⑤谷氨酸产量甚少，或增长极为缓慢。⑥镜检时可发现菌体数量显著减少。⑦平板检察有噬菌斑；摇瓶检查发酵液清晰；快速检测法OD420 2》OD650 1.⑧二级种子营养要求足渐加多，种龄延长；发酵周期足罐延长；提取困难，收率低。⑨送往提取车间的发酵液，发红、发灰、残糖高、有刺激性臭味，泡沫大、粘度大、难中和。⑩精制中和时，色素深、泡沫大，碱加不进去，过滤也有困难，过滤时间增加；成品色重、透光性差，收率低。 噬菌体污染的防止措施： 以环境净化为中心的综合治理：定期检查噬菌体、严禁活菌体排放、杀灭环境中的噬菌体、杀灭压缩空气中的噬菌体、严格无菌操作、避免噬菌体侵入设备。 污染噬菌体后的挽救措施：并罐法（噬菌体不能侵染产酸期细胞）、菌种轮换（不交叉感染）、放罐重消法（高温灭菌）、低温灭菌法 预防措施：空气净化（1.减少滤前空气的尘粒，2.减少滤前空气的油水含量3.保证压缩空气的温度4.妥善装填过滤介质5.选用高效滤材）、培养基和设备灭菌（1.合理调配培养基2.保证灭菌温度和时间3.保证设备无积污和渗漏4.保证流动蒸汽质量5.尽量减少泡沫6.正确进行空气保压）、发酵设备安装（1.防止轴封渗漏2.合理安排罐内装置3.合理安装管路4.阀门的链接）、培养物的移接（1.严格进行斜面和摇瓶菌种的无菌操作2.严格进行种子罐的无菌操作） 补救措施：补加种子、补加糖、直接放罐 染菌原因分析 从染菌时间分析：早期：培养基灭菌不彻底 中后期：设备渗漏、空气系统 从染菌类型分析：芽孢杆菌：灭菌不彻底、球菌、酵母等：设备渗漏 从染菌幅度分析：个别罐：参照上面 大面积罐：空气系统、种子 第六章 谷氨酸的提取 谷氨酸提炼：将谷氨酸生产菌在发酵液中积累的L-谷氨酸提取出来,再进一步中和、除铁、脱色、加工精制成谷氨酸单钠盐叫谷氨酸提炼。 等电点法：利用谷氨酸是两性电解质的性质，将发酵液加硫酸调pH至谷氨酸的等电点，使谷氨酸沉淀析出。 离子交换法：先将发酵液稀释至一定难度，用盐酸将发酵液调至一定的pH采用阳离子交换树脂吸附谷氨酸，然后用洗脱剂将谷氨酸从树脂上洗脱下来，达到浓缩和提纯谷氨酸的目的。 利用离子交换树脂对发酵液中谷氨酸与其它离子吸附能力的差别，将这些离子选择性地吸附到树脂上，然后用洗脱剂洗脱，从而得到谷氨酸的过程。 金属盐法：利用谷氨酸与Zn2+、Ca2+、Co2+等金属离子作用生成难溶于水的谷氨酸的目的。 离子交换膜电渗析法：根据渗透膜对各种离子物质的选择透性不同而将谷氨酸分离，如电渗析和反渗透法。 结柱现象：谷氨酸以结晶形式析出，把树脂粘结成团。 等电点-离子交换法：是发酵液经等电点法提取谷氨酸以后，再采用单柱或双柱法，将等电点母液通过离子交换树脂柱进行交换，然后用碱液洗脱树脂上的谷氨酸，收集高流分，将其与下一批发酵液合并，再用等电点法提取谷氨酸。 浓缩连续等电点法：将发酵液和硫酸同时加入等电点罐中，始终保持罐内pH在3.0~3.2，发酵液在等电点罐中采用低温等电点法结晶，待析晶完全后，以晶体及母液作为“种子”，维持一定的温度和pH，然后一边连续添加新发酵液，一边从等电点罐底部放出已结晶的谷氨酸，使进出料量保持一致，放出的物料在育晶罐中进行育晶，让晶体长大，育晶结束后进行分离，得到谷氨酸晶体。