第4章RNA的转录研究.ppt

1.概念（※） ： 转录、启动子、转录因子、顺势作用元件、反式作用因子、RNA的加工、RNA的剪接 2.概述：转录和DNA复制的区别、 模板链 3.E.coli RNA聚合酶（※）：全酶 、核心酶 、功能 4.原核生物的转录过程（※） 模板的识别：启动子、 -10序列、-35序列 起始 延伸 终止：不依赖ρ因子的终止子、依赖于ρ因子的终止子 本章学习要点 5.真核生物转录特点（※） 6.真核生物RNA聚合酶（※） 7.真核生物基因的启动子及转录起始复合物的组装： 类型II启动子（※）： TATA-box 、 CAAT-box 、 GC-box 本章学习要点 rRNA前体的加工(自学) tRNA前体的加工(自学) mRNA前体的加工（※）：5`加帽和3`多聚腺苷化 RNA的剪接： group Ⅰ intron、 group Ⅱ intron RNA的编辑 转录后加工 本章学习要点 作业 简述原核生物（E. coli）的转录的过程？ 概述转录和DNA复制的区别 3. 真核生物mRNA及其前体的帽子结构是如何形成的？帽子结构有何作用？ 4.试分析真核生物3种RNA聚合酶的组成结构特点。 5.简述真核生物基因的启动子特点及转录起始复合物的组装顺序。 6. 真核生物mRNA的3-端polyA是如何形成的？polyA有何作用？ 7. 概述与真核mRNA前体拼接有关的顺式元件和反式因子。 8. 试比较I型内含子、II型内含子和III型内含子剪接机制的异同。 本章结束 谢谢！ * Proximal---最接近的 distal—末梢的 * * 最早是根据他们从DEAE－纤维素柱上洗脱的先后顺序而定出来的，后来发现不同的生物的三种RAN聚合酶洗脱的顺序并不相同 * Tyr－酪氨酸 Thr－－苏氨酸 不同生物中重复数目不一样，重复数目对于酶的活性十分重要，缺失一半以上的重复数致死突变 * ⅡB → ⅡA的转变可使转录效率提高10倍左右 * 碱基大多为A，两侧为若干个嘧啶核苷酸 ? 两侧为富含G·C的序列 * ? 框内任何一个碱基的替代突变都是强烈的下降突变（反向） TATA是绝大多数真核基因的正确表达所必需的（没有TATA框的基因表达过程可能存在着某种替代机制） CAAT框前两个 G 的作用十分重要,缺失导致转录效率急剧下降 （距转录起始点的距离，正反方向影响都不大） * 转录方向离开72bp的起始序列优先转录（该序列中可能含有引起转录终止的序列） 增强子的详细作用机制还处于探索中 * 遗传信息“非忠实传递”，在转录后要经过扩充和修饰 人的肌营养不良2200KB，64个内含子 * 成熟RNA很少直接转录形成 RNA在基因表达的过程中起到中心作用，M携带遗传信息，T负责携带氨基酸到核糖体，R与蛋白质构成新生肽的合成场所，三种分子都要经过相应的加工才能正确行使各自的功能。 * 新合成的前体RNA分子所经历的结构和化学方面的修饰与成熟过程（P156） 发生在细胞核内，与转录同时进行并可能持续到转录之后。 真核生物前体mRNA 的加工反应：5戴帽， 3多聚腺苷酸（加尾），内含子的剪接，编辑修饰和内部腺苷酸的甲基化。 * 为什么只有mRNA加帽? 只有mRNA和某些snRNA才有帽子结构， 都由聚合酶II催化，当TFIIH磷酸化CTD重复序列中的Ser5以后，它即可以将转录因子DSIF 招募到转录复合物，而新加入到复合物之中，DSIF随后将另外一种转录因子NELF招募进来，以阻滞转录。 上述暂停允许加帽酶进入，来修饰转录物的5-端。 第三种转录因子P-TEFb是一种激酶，在帽子结构形成不久也被招募到复合物，然后磷酸化CTD的Ser2和NELF，NELF随之失活，聚合酶II继续延伸。 RNA pol II CTD的磷酸化与加尾和加帽反应的关系 3 ?端添加多聚腺苷酸 在原初RNA产物AAUAAA（加尾信号）下游约20个碱基处，由RNA末端腺苷酸转移酶，以ATP为底物添加200~250腺苷酸到mRNA 3’端的过程。 4.4.2.3 真核生物mRNA前体的加工 多亚基复合物CPSF（ cleavage and polyadenylation specificity factor ）识别和结合AAUAAA序列 切割因子CSF（ cleavage stimulation factor ）与CPSF结合，识别下游富含G/U的序列，并切割 PAP催化200~250腺苷酸的合成， PABP与腺苷酸结合 Polyadenylation Complex (多聚腺苷酸复合体) AAUAAA： ★准确切割 ★加poly（A） 多聚腺苷酸化的意义： 1.参与新生RNA从三联体复合体中的释放 2.与转录偶