第七章酶的模拟说课.ppt

2．分子印迹酶 印迹底物及其类似物 印迹过渡态类似物 3．生物印迹酶 利用配体诱导酶活性中心构象发生变化，形成一种高活性的构象形式，此种构象形式因酶在有机介质中的高度刚性或通过交联固定而得到保持。 有机相生物印迹酶 水相生物印迹酶 枯草杆菌蛋白酶从含有竞争性抑制剂的水溶液中冻干出来后，再将抑制剂除去，该酶在辛烷中催化酯化反应的速度比不含抑制剂的水溶液中冻干出来的酶高100倍 正丙醇沉淀α-胰凝乳蛋白酶和N-乙酰-D-色氨酸的酶抑制剂复合物，经干燥后再放入环己烷中，它可催化合成N-乙酰-D-色氨酸乙酯。 * * 第七章 酶的人工模拟 模拟酶（enzyme mimics） 又称人工酶（artificial enzyme）或合成酶（synzymes）， chemzymes； 模拟酶：根据酶的催化原理，模拟酶的催化功能，用有机化学和生物学的方法来合成具有专一催化功能的酶的模拟物。 三个层次： 合成具有酶类似活性的简单络合物， 酶的活性中心模拟 酶的整体模拟 SOD(Mn)及其模拟酶 细胞色素C氧化还原酶及其模拟酶 模拟酶的分类： 主—客体酶模型， 胶束酶模型； 肽酶 半合成酶 抗体酶 分子印迹酶模型等。 近年来又出现了杂化酶和进化酶。 一、主-客体酶模型 根据酶催化反应机理，合成出能识别底物（客体）又具有酶活性部位催化基团的主体分子，从而有效地模拟酶的催化过程。 主体分子：包括环糊精、冠醚、穴醚、杂环大环化合物和卟啉类等。 （一）环糊精（cyclodextrin，CD）酶模型 CD：由多个D-葡萄糖以1，4-糖苷键结合而成的一类环状低聚糖。 略呈锥形的圆筒，外侧是亲水的，其内侧是C3，C5上的氢原子和糖苷氧原子组成的空腔，具有疏水性，因而能包结（inclusion）多种客体分子，很类似酶对底物的识别。 cavity 1．? 水解蛋白酶的模拟 利用β-CD作为酶的结合部位，而连在其侧链上的羧基、咪唑基及CD本身的一个羟基共同构成催化中心，实现了胰凝乳蛋白酶的模拟。 组氨酸咪唑基的引入 2．核糖核酸酶的模拟 催化基团所处的位置可对反应的选择性起作用。 碱性条件下水解，同时产生Ⅱ和Ⅲ两种产物，而在A的催化下水解只生成Ⅲ； B催化水解反应只生成Ⅱ。 3．转氨酶的模拟 A.转氨速度比吡哆胺单独存在时快200倍；具一定立体选择性， B.乙二胺的引入不仅使反应加速2000倍以上；表现出很好的立体选择性。 4 桥联环糊精仿酶模型 多个CD分子的桥联及桥基上的功能基构成了具有协同包结和多重识别功能的催化活性中心，能更好地模拟酶对底物的识别与催化功能。 二、胶束模拟酶 胶束在水溶液中提供了疏水微环境(类似于酶的结合部位)，可以对底物束缚。如果将催化基团和一些辅酶共价或非共价地连接或吸附在胶束上，就有可能提供“活性中心”部位，使胶束成为具有酶活力或部分酶活力的胶束模拟酶 例： N-十四酰基组氨酸所形成的胶束催化对硝基苯酚乙酸酯的水解，其催化效率比不能形成胶束的N-乙酰基组氨酸高3300倍。 将疏水性维生素B6衍生物与阳离子胶束混合形成的胶束体系中，可将酮酸转化为氨基酸，有效地模拟了以维生素B6为辅酶的转氨基作用。氨基酸的收率达52% 策略： 一系列端基为咪唑基、羧基、羟基或氨基的长链化合物溶于水，形成“簇”，每个簇为一多组分混合体系，每一个组分含有一个潜在的催化基团，可与相邻的催化基团协同作用。 三、肽酶（pepzyme） 肽酶：模拟天然酶活性部位而人工合成的具有催化活性的多肽。 谷氨酸-丝氨酸-甘氨酸三肽，具有谷胱甘肽过氧化物酶的活力。 29肽ChPepz和TrPepz分别模拟胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶的活性部位，二者水解蛋白的活力分别与其模拟的酶相同。 四、半合成酶 半合成酶：以天然蛋白质或酶为母体，用化学或生物学方法引进适当的活性部位或催化基团，或改变其结构从而形成一种新的“人工酶”。 化学诱变 枯草杆菌蛋白酶ser突变为硒代半胱氨酸后，既表现出转氨酶的活性又表现出含硒谷胱甘肽过氧化物酶活性。 将辅酶引入结构已明了的蛋白质 黄素共价结合在木瓜蛋白酶上，从而将蛋白酶转变成氧化原酶。 在肌红蛋白的His-上连接钌(II)氨络合物，结果产物具有很强的氧化活性，接近天然抗坏血酸氧化酶的活力。 五、抗体酶（Abzyme） 又称催化抗体（catalytic antibody） 理论基础：过渡态理论。 制备方法： 1.过渡态类似物设计 1986年Schultz以对硝基苯酚磷酸胆碱酯（PNPPC）作为相应的羧酸二酯的过渡态类似物。 诱导产生的抗体酶使水解反应速度加快12000倍。 利用过渡态类似物制备抗体酶 2．? 抗体与半抗原互补法（