(优)PCR技术分离目的基因.pptVIP

* 第二节 PCR技术分离目的基因 一 PCR技术 1 PCR的含义 PCR（polymerase chain reaction）：模仿细胞内发生的DNA复制过程，体外大量合成目的DNA片段，包括变性、退火、延伸三个步骤。 2 PCR反应程序： （1）90－95℃模板变性 （2）37－60℃引物与模板复性（退火） （3）70－75℃引物延伸，合成模板链DNA的互补链 循环25-35次 加热 变 性 复性 复温 DNA的变性和复性 加热或强酸、碱性作用可以使 DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离,形成单链DNA,这称为 DNA的变性。 解除变性的条件后, 变性的单链可以重新结合起来,形成双链,其原有的特性和活性可以恢复,这称DNA复性, 也叫退火。 Kary B. Mullis（1944－） 引物 引物 Mullis’idea DNA聚合酶 DNA聚合酶 特定DNA片段 1983年 Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus) 酶活性(%) 温度(℃) 40 50 60 70 80 90 100 100 80 60 40 20 3 PCR反应体系的组成 1）DNA模板 2）引物 引物是指与待扩增的靶DNA两端序列互补的人工合成的寡聚核苷酸（15－30bp）。 3）dNTPs 4）耐热性DNA聚合酶 5）反应