第2章工具酶研究.ppt

基本特性：来自艾氏交替单胞菌（A.espejiana） Ca2+ 5’dNMPs 或 5’NMPs ssDNA or RNA Ca2+ Ca2+ 单链内切双链外切的核酸酶：Bal31核酸酶 诱发DNA突变（可控截短） EcoRI A B C EcoRI EcoRI B C A Bal31 B C A 环化 A C Bal31核酸酶的基本用途 来自大肠杆菌的碱性磷酸单酯酶（BAP） 从大肠杆菌中分离出来 具有抗热性 具有抗热性来自小牛胸腺的碱性磷酸单酯酶（CIP） 比活性比BAP的高出10～20倍 SDS中68℃就可完全失活 功能：催化核酸脱5`-磷酸基团，使DNA或RNA片段5`-P末端转换成5`-OH末端。 碱性磷酸单酯酶 5’p 3’HO OH 3’ p 5’ 碱性磷酸酶 5OH 3’HO OH 3’ OH 5’ 5’p OH 3’ DNA or RNA 5’ppp dN 5’pppN BAP / CIP OH 3’ 5’ HO 5’HO dN 5’HO N * 用途 防止线性化的载体份子自我连接 单一酶切口的载体的粘性末端容易自我连接。 AAGCTT TTCGAA HindⅢ酶切 A-OH TTCGA-P P-AGCTT HO-A 碱性磷酸酶 5’ 5’ 5’ * A-OH