第3章蛋白质-1研究.pptVIP

* * * * * * 例1： 现在有四个氨基酸：苯丙氨酸pI=5.5、脯氨酸pI=6.3、天冬氨酸pI=2.8和赖氨酸pI=9.7，请问在以下pH条件下进行电泳，各氨基酸的主要存在形式是什么？在外电场作用下，移向阳极还是阴极？ 苯丙氨酸 脯氨酸 门冬氨酸 赖氨酸 （1）pH=7.0 （2）pH=6.0 （3）pH=5.0 （4）pH=2.0 + 阴极 + 阴极 - 阳极 + 阴极 - 阳极 - 阳极 - 阳极 + 阴极 + 阴极 + 阴极 + 阴极 + 阴极 - 阳极 + 阴极 - 阳极 + 阴极 将Lys, Arg, Asp, Glu, Tyr,Leu,Thr和Ala的8种氨基酸混合物在pH3.0下加到磺酸型阳离子交换树脂中，然后用提高pH和盐浓度的洗脱剂进行洗脱，试预计它们被洗脱下来的顺序。 作用力：（1）离子交换；（2）氨基酸侧链与树脂基质(聚苯乙烯)之间的作用力。 Asp Glu Tyr Thr Leu Ala Lys Arg 2.77 3.22 5.66 5.87 5.98 6.02 9.74 10.76 Asp, Thr, Glu, Ala, Leu, Tyr, Lys, Arg。  例2： p.82 7. p.106 9. 例3：向1L 1mol/L的处于等电点的gly溶液加入0.3 mol HCl，问所得溶液的pH是多少？如果加入0.3 mol NaOH以代替HCl时，pH将是多少？ 解：已知pK1’=2.34， pK2’=9.60 ，pI=5.97 H3N+CH2COOH 　 H3N+CH2COO- H2NCH2COO- 酸 碱/酸 碱 gly+ gly± gly- 例4. 计算下列物质0.3mol/L溶液的pH： (a)亮氨酸盐酸盐； (b)亮氨酸钠盐； (c)等电亮氨酸。[(a)约1.47,(b)约11.58, (c)约6.02] H3N+CHCOOH 　 H3N+CHCOO- H2NCHCOO- R R R 2.36 9.68 例5. 计算lys的ε-NH3+ 20%解离时溶液的pH。 解：pH = pKR + lg(20% /80%) pKR = 10.53 pH = 10.53 + lg0.25 = 9.928 例6. 计算glu的γ-COOH 2/3解离时溶液的pH。 解：pH = pKR + lg2 pKR = 4.25 pH = 4.25 + 0.3 = 4.55 例7. 计算0.1 mol/L Gly在等电点时主要离子的浓度 解：已知pK1’=2.34， pK2’=9.60 ，pI=5.97 H3N+CH2COOH 　 H3N+CH2COO- H2NCH2COO- gly+ gly± gly- 2.3×10-5 mol/L 0.09995 mol/L 2.3×10-5 mol/L 酸 碱/酸 碱 99.95% 例8. 计算0.1 mol/L的glu溶液在等电点时主要的离子浓度。 解： 已知pK1’=2.19， pK2’=9.67，pKR’=4.25 ，pI=3.22 H3N+CHCOOH 　H3N+CHCOO- H3N+CHCOO- H2NCHCOO- glu+ glu± glu± glu= 0.00786mol/L 0.08427mol/L 0.00786mol/L 2.79×10-9 mol/L x 酸 y 碱/酸 z 碱/酸 w 碱 84.27% R-COOH R-COOH R-COO- R-COO- pK1’ pKR’