实验1 酪蛋白的制备.ppt

实验一 酪蛋白的制备 目的要求 掌握等电点法分离蛋白质 学习从牛乳制备酪蛋白的原理和方法 实验原理 酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，牛乳中酪蛋白含量平均为35克/L。 酪蛋白在其等电点时溶解度低，将牛乳调至PH4.8，酪蛋白可从牛乳中分离出来。 酪蛋白不溶于乙醇，从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。 实验方法 等电点法 离心分离技术 实验试剂 牛乳 醋酸钠缓冲液0.2M、PH４.8 乙醇（用于除脂） 乙醚（用于脱水） 1. 40℃水浴预热,布朗运动加速蛋白分子的碰撞。 2.等电点附近蛋白质的溶解度最低，并不意味着蛋白质会沉淀出来。 3.酪蛋白是酸性，溶解于碱性溶液中，方便下次双缩脲法测定 注意事项 离心机使用安全说明： 1.离心前配平 2.离心中不能用手触摸机体 3.停止旋转后再取离心管 移液管的正确操作 离心机操作 1.开启离心机电源开关。 2.打开离心机机舱盖。 3.检查离心机转头与离心管的规格是否适配。 4.平衡离心管及内容物（把装有样品的离心管放在托盘天平上配平）。 5.把平衡好的离心管盖紧后，对称放入离心管仓中。 6.关好离心机舱盖，在操作面板上设置好转速与时间。 7.启动运行按钮，在运行过程中应注意离心机有无异常声音或异常气味。若有，应立即切断电源，等转头停止运转后，再进行检查。 8.离心结束后，打开舱盖，小心取出离心管，切勿震动或摇晃，以免沉淀悬浮。 移液管的使用 移液管的手持方法 取液 读数 读数 释放液体时，将试管侧放45°，并停留15s。部分液体附着在移液管的管尖中，是正常现象。 思考题 1.用缓冲液、乙醚、乙醇洗涤沉淀的目的是什么？ 2.离心机操作的注意事项？ * * 牛乳4ml 40℃水浴预热10分钟（HAC缓冲液同时预热）用滴管加入HAC缓冲液约4ml（PH4.8）离心，10000转/分，5分钟 清液 沉淀 清液 沉淀 清液 沉淀 清液 沉淀 用4ml蒸馏水洗涤离心,10000转/分,5分钟(除沉淀中可溶物) 95%乙醇4ml洗涤离心，10000转/分，5分钟(除脂) 乙醚4ml洗涤离心，10000转/分，5分钟(脱水) 0.1NNaOH4ml加水至10ml 待测 *