全自动菌落分析仪在制药与医疗行业应用.doc.docVIP

制药与医疗 抗生素效价测定 抑菌圈测量是微生物分析的经典方法。它是利用抑菌物质在涂布特定试验菌的琼脂培养基内成球形立体状扩散，抑制试验菌的繁殖，在抑菌物质的周围形成透明圈，即抑菌圈。? 管碟法测定生物效价：利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，采用量反应平行线原理 的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。 制药企业，药检所常常进行抗生素的效价测定，最普遍的方式就是管碟法测定生物效价。管碟法测定生物效价实验中存在大量抑菌圈测量工作，常规都是用游标卡尺手工测量抑菌圈的直径，如今可以用仪器自动进行分析，提高检测精度，减少测量误差。 迅数-自动抑菌圈测量系统是通过CCD 采集数字图像后，进行自适应差分滤波预处理，采用改进的四叉树交叉熵分割算法进行准确快速的分析，精确检测出抑菌圈直径数据，最后对数据建模统计，自动得到分析结果。所有分析过程只要一秒就可以完成。 手动测量存在的问题有： 1. 重现性差，准确性不够：同一培养皿，不同的人测量结果有差异； 2. 当抑菌圈呈卵原形、边缘模糊 或出现双层圈 时，边界确定的人为误差大； 3. 一个培养皿内有大量 抑菌圈时，如做菌种筛选时，无法人工测量； 自动抑菌圈测量的好处在于： 快速、精度高、重现性好、操作简单。 微生物限度检查 微生物限度检查法是指检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。检查法有平皿法和滤膜法，都可借助全自动菌落分析仪实现菌落自动计数。?? 　　微生物限度检查法应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室( 区 )悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。?? 　　供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为 30 ～ 35℃ ；霉菌、酵母菌培养温度为 23 ～ 28‘C ；控制菌培养温度为35 ～ 37℃ 。检验结果以 1g 、 1m1 、 10g 、 10ml 或 10cm 为单位报告。?? 　　细菌数、霉菌数、酵母菌数检查法：??? 　　平皿法：取均匀供试液，用 pH7.0 氯化钠 - 蛋白胨缓冲液稀释成 1 ∶ 102 、 1 ∶ 103 等稀释级，取适宜的连续 2 ～ 3 个稀释级的供试液进行菌数测定。 营养琼脂培养基用于细菌计数，玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌计数。在特殊情况下，前者同时点计霉菌、酵母菌菌落数，后者同时点计细菌菌落数。酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。合剂用玫瑰红钠琼脂培养基与酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基分别测定霉菌、酵母菌菌落数，合并计数。液体制剂用玫瑰红钠琼脂培养基同时点计霉菌菌落数及酵母菌菌落数。?? 　　过滤法： 应采用开放式薄膜过滤法，滤膜的孔径不大于 0.45 μm。选择滤膜材质时应考虑供试品及其溶剂的特性。培养和计数同平皿法，每片滤膜上的菌落数应不多于 100 个。 活性物质筛选 很多生物活性物质的筛选实验中，会用抑菌圈（变色圈，透明圈）或菌落的直径、面积及其变化来作为生物筛选指标或生物效价测定指标。迅数仪器的菌落形态分析功能可以瞬间完成对平板上所有几百个菌落的直径，圆度，面积，周长等形态的自动分析；迅数仪器抑菌圈测量功能可瞬间对平板上多个抑菌圈的位置和大小进行自动识别和测量。所有数据可导出到EXCEL表中进行进一步统计分析。数字化的菌落形态分析和抑菌圈测量使这类实验的数据统计更高效更精确。 应用案例： 某跨国公司研究人员通过实验建立了米曲霉在高盐稀态发酵工艺中的筛选模型，即双层酪蛋白平板筛选模型。研究人员发现：米曲霉产酶能力的高低可以通过酪蛋白平板上的菌落直径的大小和菌落周围产生的透明圈直径与菌落直径的比值 k 来确定 , 菌落直径和 k 值相对都较大时 , 该菌株产酶能力较高。 研究人员在实验中引入迅数自动菌落分析系统，可快速完成透明圈直径、菌落直径的测量，从而快速判断米曲霉产酶能力高低，极大地提高了实验效率和准确度。　 药物安全评价（GLP）-AMES毒理分析 药物安全评价的毒理学实验以生物学实验方法为其主要手段，具有独特的专业特点。国 际标准ISO/IEC17025《检测与校准实验室能力的通用要求》、ISO15189《医学实验室质量和能力的专用要求》和GLP（良好实验室操作规范）是毒理实验室的管理基础。目前，毒理实验仪器设备也随着研究和安全性评价的需求，向建立高效、灵敏、科学性更强的高水平检测技术平台方向发展。 AMES 实验