细胞工程复习重点..docx

思 考 题1．细胞工程实验室的基本组成与要求是什么？一、实验室组成1．基本实验室①准备室/化学实验室功能： 就是进行一切与实验有关的准备工作要求： 宽敞明亮，通风条件好 ，地面便于清洁并应防滑处理。②接种室/无菌操作室功能： 是进行接种、继代、细胞融合等无菌操作的场所。要求： 封闭性好，干燥清洁明亮， 防止空气对流。外应设缓冲室、更衣室 。防止微生物感染。③培养室功能： 是对接种到培养瓶的离体材料进行控制培养的场所。要求： 是要能控制光照和温度，应保持干燥和清洁，2．辅助实验室根据具体的实验需求而定。细胞学实验室生化分析室摄影室及暗室3. 移栽设施/温室要求：配置人工光源并且能够控制室内温度，为试管苗的正常生长提供适宜的环境。2．外植体消毒的基本方法是什么？3. 无菌操作在植物离体培养中的作用是什么？4. 配制培养基时，加入一定量的植物生长调节物质，它们在离体培养过程中有哪些作用? 激素调控的一般规律是什么？植物激素或生长调节剂（ growth regulators）包括：? 生长素类（ auxin）? 细胞分裂素类(cytokinin,CTK)? 赤霉素类 (GA)? 乙烯（ Eth)? 脱落酸(ABA)? 其中前三者为正向激素，后两者则为负向激素。? 常用的主要有生长素类和细胞分裂素类两大类。①生长素类（ auxin）： 在作用或结构上类似于吲哚乙酸的一类物质的统称。生长素是最早发现的植物激素。作用： 诱导愈伤组织形成，促进细胞的分裂和伸长，诱导根原基的发生和根系的生成，有调运养分的效应。使用浓度0.1～10mg/L。常用的生长素有:吲哚乙酸 (IAA)、2， 4，二氯苯氧乙酸 (2,4-D) ?吲哚丁酸 (IBA) 。奈乙酸 (NAA)、?②细胞分裂素类(cytokinin,CTK) ： 是一类促进细胞分裂的植物激素，细胞分裂素都为腺嘌呤的衍生物作用： 促进细胞分裂和分化，诱导不定芽的形成，促进胚状体的发育，延缓组织的衰老，打破顶端优势，有利于芽的增殖，常用于继代和增殖培养。使用浓度0.1～10mg/L。常用的细胞分裂素有：?激动素 (KT)?6-苄基腺嘌呤 (6-BA/BAP)?玉米素 （ ZT）?异戊烯氨基嘌呤 (2-ip)?噻重氮苯基脲 （ TDZ） 5. 常用的植物细胞培养基种类有哪些？各有什么特点?MS培养基无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也高。其养分的数量和比例较合适，离子平衡性较好，具较强的缓冲能力，培养过程中较稳定，可满足植物的营养和生理需要。其中它的硝酸盐含量较其它培养基为高。广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。有些培养基是由它演变而来的。Ｎ6 培养基ＫＮＯ3和（ＮＨ4） 2ＳＯ4 含量高，VB1含量高，不含钼。目前在国内已广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花粉和花药培养和组织培养。Ｂ5培养基ＫＮＯ3含量高，有机物含量较高，但含有较低的铵，这可能对不少培养物的生长有抑制作用。从实践得知有些植物在Ｂ5培养基上生长更适宜，如双子叶植物特别是木本植物H培养基大量元素约为1/2MS，微量元素减少但含量增加，维生素种类较多。用于多种植物的花药、胚培养。Ｗhite 培养基特点：是无机盐浓度较低，有机成分含量也相对较低。适于生根培养。ＫＭ-８Ｐ培养基有机成分较复杂。它包括了所有的单糖和维生素。广泛用于原生质体和融合体的培养6．简要说明MS培养基的基本组成。7. 配制培养基时，为什么要先配母液?如何配制母液?在组织培养工作中， 配制培养基是日常工作，为了简便起见， 将培养基配方中的药品配成一定倍数的浓缩液， 用时稀释， 这种浓缩液就是母液贮备液。? 母液储备液可一次称量供一段时间使用， 简单方便， 不仅可以提高培养基中微量成份称量的准确性， 还可以减少工作量， 提高效率母液贮备液的配制要求?①大量元素母液配制： 10x， 20x， 50x?②微量元素母液配制： 1000x?③铁盐母液配制： 100x或200x , 分别溶解EDTA-Na2 与FeSO4· 4H2O，再充分混匀，贮存在棕色瓶中?④有机母液配制：可以分别配制100～200X，也可以混在一起配制?⑤肌醇一般单独配置成100x。?⑥生长调节物质配制：分别单独配制成母液，储存于冰箱。一般浓度为0.1～1 mg／ml。并注意不同激素需加入不同助溶剂8. 如何判断配制好的培养基是否良好？9. 植物培养基和微生物培养基有什么不同？第三章1．植物细胞全能性的含义是什么？其实现的途径是什么？每个植物生活细胞无论是体细胞还是生殖细胞，均具有该物种全部的遗传信息。每个植物生活细胞均具有发育成完整植株的潜在能力细胞全能性仅是一种能力或可能性，不是所有具有全能性的细胞都能进行全能性的表达。离体培养条件下，植物体细胞、性细胞、原生质体、经过遗传信息修饰的细