DNA的损伤与修复分析.pptVIP

错配修复对DNA复制忠实性的贡献力达102-103，DNA子链中的错配几乎完全都被修正，充分反映了母链的重要性。错误的碱基配对可以通过母链中识别标记区分； 标记是GATC（回文结构）中A甲基化，E.coli中的3个蛋白质（MutS、MutH和MutL）校正。该修复系统只校正新合成的DNA，因为新合成DNA链的GATC序列中的A（腺苷酸残基）开始未被甲基化。GATC中A甲基化与否常用来区别新合成的链（未甲基化）和模板链（甲基化）。 3、碱基错配修复 错配修复系统作用机制： ⑴MutS蛋白识别错配的碱基；并吸引MutL 蛋白到这个位置，新生链的GATC序列未甲基化； ⑵ MutL 蛋白激活MutH蛋白，在新链的未甲基化的GATC打开缺口； ⑶外切核酸酶切除3’到5’方向错配碱基与GATC序列之间的间隔的DNA序列，聚合酶填补空缺； ⑷DNA连接酶封闭缺口，甲基化酶在新链甲基化。 新复制DNA的新旧链区别 E.Coli 错 配 修 复 系 统 作 用 机 制 重组修复(recombination repair) 这是DNA的复制过程中所采用的一种有差错的修复方式。 修复时，利用重组蛋白RecA的核酸酶活性，将另一股健康亲链与损伤缺口相互交换。 某些DNA修复发生在跨越损伤DNA的复制事件之后（了解） 重组修复步骤： ⑴将正常母链上一段与损伤子链缺口同源片 段转移进行重组，使母链上带有缺口； ⑵DNA聚合酶填补母链上的缺口； ⑶DNA连接酶封口。 损伤的DNA经过数代复制可得到稀释，从而对细 胞的影响减至最小。 重组修复 SOS 修 复 1、当DNA损伤广泛难以继续复制时，由此而诱 发出一系列复杂的反应。 2、在E. coli，各种与修复有关的基因，组成 一个称为调节子(regulon)的网络式调控系统。 3、这种修复特异性低，对碱基识别、选择能力差。 通过SOS修复，复制如能继续，细胞是可存活的。 但DNA保留的错误较多，导致较广泛、长期突变。 SOS反应的机制（大肠杆菌应急修复系统） 未诱导的细胞 靶基因 lexA基因被LexA 蛋白质部分阻遏 recA基因被LexA 蛋白质部分阻遏 （?40个不同的位点被阻遏） LexA(阻遏物) RecA(辅蛋白酶) 靶基因表达 lexA靶基因表达 但产物被分解 recA大量表达 RecA促使分解LexA 诱导的细胞 单链DNA ATP 五、DNA损伤修复系统与疾病（了解） 第二章 DNA损伤与修复 第二节 DNA 损伤 一、DNA损伤因素 （一）内源性损伤(体内因素) 1、DNA复制错误：碱基配对从A-T转换成G-C。 2、碱基自身互变异构体：C的异构体与A错误配对。 3、自发的化学变化 4、氧化损伤 （二）外源性损伤（体外因素） 1、物理因素 2、化学因素（化学试剂） 二、多种化学或物理因素可诱发突变 1、大量的突变属于自发突变，发生频率只不过在10-9左右。但由于生物基因组庞大，细胞繁殖速度快，因此它的作用是不可低估的。 2、实验室用来诱发突变，也是生活环境中导致突变的因素，主要有物理和化学因素。 物理因素： 紫外线(ultra violet, UV)、各种辐射 UV 化 学 因 素 ： 三、突变在生物界普遍存在 （一）突变是进化、分化的分子基础 1、DNA突变具体指个别dNMP残基以至片段DNA在构成、复制或表型功能的异常变化，也称为DNA损伤(DNA damage)。 2、从分子水平来看，突变就是DNA分子上碱基的改变。 3、从长远的生物史看，进化过程是突变的不 断发生所造成的。 4、大量的突变都是属于这种类型，只是目前还未能认识其发生的真正原因，因而名为自发突变或自然突变(spontaneous mutation)。 （二）只有基因型改变的突变形成DNA的多态性 1、这种突变没有可察觉的表型改变，例如在 简并密码子上第三位碱基的改变，蛋白质非 功能区段上编码序列的改变等。这些现象也 相当普遍。 2、多态性(polymorphism)一词用来描述个体之 间的基因型差别现象。 （三）致死性的突变可导致个体、细胞的死亡 （四）突变是某些疾病的发病基础 四、引起突变的分子改变类型有多种 错配 (mismatch) 缺失 (deletion) 插入 (insertion) 重排 (rearrangement) 框移 (frame-shift) DNA分子上的碱基错配称点突变(point mutation)。 自发突变和不少化学诱变都能引起DNA上某一碱基的置换。 点突变发生在基因的编码区，可导致氨基酸改变。 （一）错配可导致编码氨基酸的改变 镰形红