miRNA分析.ppt

miRNA的研究背景 DNA、RNA和蛋白质是生命科学研究的三大主题，DNA、RNA和蛋白质之间的关系是经典和现代中心法则的核心内容；通常情况下，RNA是DNA和蛋白质之间的“过渡”。近年来的研究表明，RNA在生命进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。 miRNA在正常生理过程中的作用 例如：miR-273和lys-6编码的miRNA，参与线虫的神经系统发育过程；miR-430参与斑马鱼的大脑发育；miR-181控制哺乳动物血细胞分化为B细胞； 另有研究人员发现许多神经系统的miRNAs在大脑皮层培养中受到时序调节，表明其可能控制着区域化的mRNA翻译。 对于新的miRNA基因的分析，可能发现新的参与器官形成、胚胎发育和生长的调节因子，促进对癌症等人类疾病发病机制的理解。 miRNA的检测手段 Northern Blot 主要手段，敏感度低、耗时长、RNA 的用量较大。 实时荧光定量PCR：茎环结构的逆转录引物能与miRNA 3‘端部分结合，在逆转录酶的作用下进行逆转录反应，然后特异的正反向引物和SYBRGreen荧光染料（或探针）共同参与的定量PCR反应体系，实现对逆转录产物进行定量检测。 基因芯片技术 结语 长期以来，分子生物学研究的重点都集中在蛋白质编码基因上，而微RNA的发现和研究则提示我们应该相对更多地从这方面了解生命的奥秘，这些微RNA可能编码生命活动的重要调控元件。微RNA还有很多问题需要我们去研究：它们的作用机理究竟是什么，到底具有何种功能，它们是如何识别潜在的靶mRNA的，这些miRNA间相互调节作用的结果是什么，以及它们的时序性和特异性是如何调控的等等。随着研究的深入，相信其在研究人类的疑难杂症的发生机理和治疗等方面均具有较为深远的意义和作用。总之，对于微RNA基因的研究将是生命科学领域研究的热点，也是揭示生命奥秘的又一大里程碑。 miRNA简介 miRNA的研究背景 miRNA的定义 miRNA的合成途径 miRNA与siRNA的区别 miRNA在正常生理过程中的作用 miRNA与癌症 miRNA的检测手段 结语 目录 尽管早在1993年，科学家就发现了第一个miRNA，但直到RNA干扰（RNA interference，简称RNAi）被发现，人们对RNA调控基因表达的功能才有了全新的认识，还因为RNAi可以简化/替代基因敲除，是一种研究基因功能的得力工具，使得RNAi在2002年度Science评选的10大科学成就中名列榜首。此后，这种小RNA分子的大作用才不断被发现。研究人员开始认识到：小RNA的世界一点都不小。有人推测：小分子RNA可能代表新层次上的基因表达调控方式。 研究显示：miRNA通过与转录本的相互作用，关闭或抑制基因的表达，调控至少 30% 以上的基因表达，参与多种生理病理过程 。 miRNA在多个组织中，例如正常和肿瘤组织中差异表达。因此，通过表达谱分析寻找疾病相关miRNA并进行发病机理研究，最终应用于肿瘤诊断和治疗，已经成为目前miRNA研究的重要方向。 在研究中，从深度测序，miRNA芯片到通过导入化学合成的mimics antag omirs等实现miRNA过表达和抑制，都是研究常用的方法. miRNA ？？？ 微RNA（microRNAs 简称miRNA）是一类在真核生物中广泛存在的，进化上高度保守的小分子非编码RNA，长度大约22nt左右，5′端有一磷酸基团, 3′端为羟基, 这一特点使它与大多数寡核苷酸和功能RNA 的降解片段区别开来,具有高度保守性、时序性 、和组织特异性,具有转录后调控基因表达的功能. miRNA由基因编码，从DNA转录而来，但无法进一步蛋白质。在动物中，一个微RNA通常可调控数十个基因。这些RNA是从初级转录产物（primary transcripts），也就是pri-miRNA，转变成为称作pre-miRNA的茎环结构，最后成为成熟的并具有功能miRNA。成熟的miRNA通过与靶信使核糖核酸（mRNA）特异结合，从而抑制转录后基因表达，在调控基因表达、细胞周期、生物体发育时序等方面起重要作用。 每个miRNA可以调控多个（甚至上百个）靶基因，而特定靶miRNA也可以同时被多个miRNAs调节。和编码蛋白的mRNA相同，miRNA基因上游同样有启动子，启动子区的CpG岛发生甲基化，也会影响下游基因表达。在一些肿瘤细胞（例如淋巴瘤）中，miR-34a上游CpG岛发生甲基化导致miR-34a表达水平降低；而在另一些肿瘤细胞（如胰腺癌）中，TP53突变产生同样结果，显示了miRNA表达调控的多层次。另外，基因缺失，重排等，以及环境因素，例如缺氧