志贺氏菌检验分解.pptVIP

志贺氏菌的检验 一、流行病学简介 一种古老的肠道传染性腹泻。19世纪曾出现全世界菌痢的大流行。 1899年，日本人志贺氏首先发现菌痢是由痢疾杆菌引起。 第一次世界大战期间（1914-1918年），德国死于痢疾者约4万余人，并进一步证实痢疾杆菌是菌痢流行的病原。 每年均有志贺菌感染暴发的报告，每次暴发的发病人数在数十人到上千人不等。多数由于食物和饮水污染引起。 1994年5月11日，江苏省无锡市发生一起26所小学的学生因课间餐食用豆奶导致1345人食物中毒的事故，后经调查是一起志贺菌和致病性大肠杆菌混合感染引起的食物中毒，此次爆发波及范围之大，发病人数之多，在我国历史上颇为少见。 志贺菌致病力强，少量细菌进入人体即可引起发病。是否发病，取决于细菌数量、致病力（粘附、侵袭力、毒素）和人体的抵抗力。 各种志贺菌都可以产生强烈的内毒素，是引起全身毒血症的主要因素。志贺菌还可产生外毒素（志贺毒素），具有神经毒、细胞毒和肠毒性作用，能引起更严重的临床表现如溶血性尿毒综合症等。 二、生物学特性 （一）、形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛 2~3um*0.5~0.7um （二）、培养特性 1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2~7.4 2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落 3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。 4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。 （三）、生化反应 1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。 （四）、抗原结构 1、抗原构成： O抗原： 群特异性抗原：A、B、C、D K抗原：除B群外，一般有K抗原 2、志贺氏菌的分群与血清型 志贺氏菌分为四群： A群（痢疾志贺氏菌）：1~10型 B群（福氏志贺氏菌）：1~6型+X、Y两个变种， C群（鲍氏志贺氏菌 ）：1~15型 D群（宋内氏志贺氏菌） ：1个型 三、志贺氏菌检验GB 4789.5-2012 1.以原国标为基础，保持与原标准的连续性 考虑基层单位方法的可操作性，对增菌步骤、培养条件尽可能简化；生化反应方面亦尽量沿用原标准中的方法 2.与国际接轨的原则 该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准 ，部分参考采用了美国FDA、NMKL等标准 智能厌氧微需氧培养系统 初步生化:三糖铁（TSI） 现象 说 明 底层 黄色 葡萄糖阳性 红色或不变色 葡萄糖阴性 黑色 产H2S 气泡 产气 斜面 黄色 乳糖和（或）蔗糖阳性 红色或不变色 乳糖和（或）蔗糖阴性 志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。 如图中2号管的反应. * 细菌性痢疾历年来一直是我国夏秋季发病率最高的肠道传染病。 近年来报道非洲及中美洲流行的痢疾志贺菌病死率达5%-15%。 我国属发展中国家，人民的生活条件虽然在不断改善，但由于部分地区卫生知识普及不够，食品卫生管理、监督不力，使得志贺菌的感染在我国传染病中多年来一直处于较高的地位。 3.与现有已颁布的新版国家标准协调统一 参考了已颁布的2008版国标，在样品的前处理步骤，培养条件的选择，文字描述等方面尽量 保持一致。 GB/T 4789.5-2003标准不足处 1. 采用GN增菌肉汤,37℃需氧培养,4小时后大肠菌的生长速度大大超过志贺氏菌, 检测效果较差 2. 使用的分离平板SS对志贺1型有抑制 3. 检验方法与现行的其它国家的标准存在差异 增菌：用GN增菌液使处于濒死状态的细菌恢复活力 选择性平板分离培养：XLD+MAC/显色培养基 生化试验：可采用API 20E或VITEK2 血清学鉴定：特异性诊断血清鉴定到种。 志贺氏菌操作流程 修 改 的 内 容 增菌部分 志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ） 原国标：GN ISO ：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ） FDA：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL 和3 μg/mL ） NMKL：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ） 培养条件：41.5℃±1℃ 厌氧培养 原国标： 37℃需氧培养 ISO： 41.5℃厌氧培养 FDA： 42℃（除宋内其他志贺菌) 和44℃（宋内）厌氧培养 NMKL： 42℃厌氧培养