离心机基础知识例析.pptVIP

分离分析仪器 引 言 在临床核酸检测中，从血液标本中把特定靶核酸纯化至适用于扩增检测，常需台式高速离心机。离心分离对于血液核酸检测来说，是一个必不可少的手段。充分了解离心机的性能特性，并正确使用离心机，对保证核酸提取的成功极为重要。 一、离心机的基本原理 生物学领域：分离出化学反应后的沉淀物，天然的生物大分子、无机物、有机物。 医学领域：主要用于分离、纯化细胞、病毒、蛋白质、酶和核酸。 一、离心机的基本原理 离心机对旋转颗粒进行沉降分离的物理学基础是通过离心力对旋转颗粒的作用。 当将样品放入离心机转头的离心管内，离心机驱动时，样品液就随离心管做匀速圆周运动，于是就产生了一个向外的离心力 旋转区域的半径越大、旋转的速度越快，则离心力越大，颗粒沉降也越快。 一、离心机的基本原理 由于不同颗粒的质量、密度、大小及形状等彼此各部相同，在同一大小的离心场中沉降速度也就不相同，颗粒沉降的顺序有颗粒密度的大小所决定的，密度越大越先沉降，由此便可以得到相互间的分离。 二、离心力和相对离心力 液体中的固相颗粒做圆周运动时产生一个向外的力，称之为离心力。 F=mrω2 F为离心力的强度 m为沉降颗粒的有效质量 ω为离心转子转动的角速度，其单位为rad/s r为离心半径（cm），即离心机轴中央到水平离心机试管底部的距离，或垂直式离心机试管口中央的距离。 二、离心力和相对离心力 离心力与转速、颗粒质量和离心半径相关，转速和颗粒质量越大，离心力越大，也随着离心半径的减小而降低。 相对离心力（RCF，Relative centrifugal force）是指在离心场中，作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度“g” 。例如25000×g，则表示相对离心力为25000。 二、离心力和相对离心力 离心力通常以相对离心力（Relative centrifugal force，RCF）表示，即离心力F的大小相对地球引力（G）的多少倍，单位为g 相对离心力 RCF的值 （g值）取决于转子的转速 （rpm）和旋转半径 （r, 以mm计算），可用如下公式表示 （rpm ：revolutions per minute每分钟转数，r/min） 二、离心力和相对离心力 根据RCF值（g）、 rpm值（ r/min ）、r值（mm）之间的关系，如已知其中两个值即可计算出未知值。 如某离心机转速为8000 r/min ，旋转半径为20mm时，相对离心力RCF值约为150000g 如某离心机转速为5000 r/min ，旋转半径为40mm时，相对离心力RCF值约为1100g 二、离心力和相对离心力 卫生部临检中心建议核酸样本离心条件为800-1600g 20min 检验科自动平衡恒温离心机旋转半径为100mm，则应选择转速为：2700-3800 r/min 由于F值的不同，RFC相差也会很大，实际应用时一般取平均值，检验科对核酸样本的离心条件为：离心机内温度2-8℃，转速在3000 r/min，离心20分钟。 三、离心机的分类与结构 根据离心机的转速，离心机可分为： 低速离心机 高速离心机 超高速离心机 三、离心机的分类与结构 低速离心机：最大转速10000rpm，容量为几十毫升至几升。转子有角式和外摆式，其转速不能严格控制，通常不带冷冻系统，于室温下操作，用于收集易沉降的大颗粒物质，如血细胞的分离等。 三、离心机的分类与结构 高速离心机：最大转速为20000～25000rpm，最大容量可达3升。转头多样。一般都有制冷系统，以消除高速旋转转头与空气之间摩擦而产生的热量，离心室的温度可以调节和维持在0～40C。通常用于微生物菌体、细胞碎片、大细胞器、免疫沉淀物等的分离纯化工作，但不能有效地沉降病毒、小细胞器(如核蛋白体)或单个分子。 三、离心机的分类与结构 超高速离心机：转速可达50000～80000rpm，相对离心力最大可达510000g，离心容量由几十毫升至两升，设有冷冻系统、真空系统和安全保护系统。分离的形式是速率区带离心和等密度区带离心。最著名的生产厂商有美国的贝克曼公司和日本的日立公司等。 离心机组成结构：驱动电机、制冷系统、显示系统、自动保护系统和控制系统组成。必要的配件为离心转头和离心管。??????? 离心转头与离心杯 离心转头的注意事项 1.每个转头各有其最高允许转速和使用累积限时，使用转头时要查阅说明书，不得过速使用。每一转头都要有一份使用档案，记录累积的使用时间，若超过了该转头的最高使用限时，则须按规定降速使用。 2.转头是离心机中须重点保护的部件，搬动时要小心，不能碰撞，避免造成伤痕，转头长时间