冰银三通片大鼠长期毒性试验要点.doc

冰银三味通片的长期毒性研究及其文献综述 摘要：冰银三味通片由银杏叶提取物、霪羊霍和冰片组成，片重0.5克的棕褐色糖衣片，每片还有原料药物0.35g，由葫芦岛帝国药业有限公司研制提供，批铝塑包装，室温阴凉处保存。根据《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》，编号：[Z] GPT-3-1，采用Wister大鼠评价了冰银三味通片的长期毒性。结果表明，采用临床剂量的20、40、80倍（1.03、2.06和4.12g/kg动物体重,分别相当于5.2、10.4和20.8g生药/kg动物体重）口服给药28周，低剂量组大鼠无死亡，但是高、中剂量组动物都有死亡，且呈现剂量依赖性。动物死亡的原因：腹泻，胃、小肠和大肠溃疡、穿孔和肿块，但未见脏器系数、血液学指标（RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MCHC、RCT、PLT、PT和WBC）、血液生化指标（AST、ALT、ALP、CK、BUN、Cre、TP、ALB、GLU、T-BIL、T-CHO、TG、Na、K和Cl）显著异常。动物解剖后，取主要脏器（脑、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、肾上腺、胃、小肠、大肠、甲状腺、胸腺、膀胱、睾丸、附睾、卵巢、子宫、脾脏、垂体、脊髓、骨髓、淋巴结、坐骨神经、气管、主动脉、食管和唾液腺）进行组织病理学检查。结果表明，胃、小肠和大肠有发生溃疡，大肠有产生肿块，甚至穿孔。部分动物于停药好继续饲养两周，正常进食饮水，两周后处死解剖进行同样观察和测定。结果表明，体重略有回升，溃疡、穿孔和肿块未能消失。但是，未见到迟发毒性作用。 上述研究表明，冰银三味通片长期服用可能引起消化性溃疡，甚至引起大肠溃疡、肿块，主要毒性靶器官是消化道。临床剂量下服用2个月，除可能产生消化性溃疡之外，预计不会产生其他严中不良反应。临床研究中，应重点监测消化系统不良反应。 1．试验目的 本研究的目的是根据《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》的有关要求，采用Wister大白鼠研究冰银三味通片（银杏叶提取物：霪羊霍：冰片，8：10：5，w/w/w）的长期毒性，为冰银三通片的临床药理研究提供可靠的毒性试验依据，主要包括：预测冰银三味通片可能引起的临床不良反应；推测冰银三味通片的临床毒性靶器官或靶组织；预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量；提示冰银三味通片临床试验中应该重点监测的指标；为冰银三味通片的临床试验中的解毒或解救措施提供参考信息。 2．试验材料 2.1 受试物 冰银三味通片由银杏叶提取物、霪羊霍和冰片组成，片重0.5克的棕褐色糖衣片（银杏叶提取物：霪羊霍：冰片，8：10：5，w/w/w），每片还有原料药物0.35g，由葫芦岛帝国药业有限公司研制提供，批20080919，铝塑包装，室温阴凉处保存。 2.2 试验动物 预备Wister大鼠120只，体质健康，雌（未孕）、雄各半，体重60-70g，6-9周龄，由沈阳医学动物实验中心提供（动物合格证：SCSK,辽2003-0016）。筛选出80只用于本项研究。饲料由沈阳医学动物实验中心提供提。实验条件：雌雄分笼饲养，每笼10只。室温：18-30℃，相对湿度：40-50%，标准饲料，笼具每周清洗、75%乙醇消毒1次，大鼠垫料由沈阳医学院动物试验中心提供，每周更换一次。实验前动物在实验室饲养房内观察7d左右，一般体征正常方可用于实验研究。2.2 仪器与药品 DT2000型上皿电子天平，沈阳洁龙仪器公司生产；光镜、普通切片机由沈阳医学院附属医院病理科提供。甲醛，沈阳化学试剂厂；乌拉坦，上海海曲化工有限公司。10%甲醛溶液和20%乌拉坦溶液，自行配制。 3．方法 3．1 实验分组 动物先按性别分组别，再按体重差别最小原则分成4组，即赋型剂对照组、冰银三通片的低剂量、中剂量和高剂量组。每组20只Wister大白鼠（体重：60-70g），雌雄各半，各组动物体重分别为：赋型剂对照组65.3±4.0g，低剂量组65.6±2.9g，中剂量组65.2±2.7g，高剂量组65.3±2.9g。 3．2 给药剂量、途径及给药时间 采用临床剂量的20、40、80倍（每日剂量分别为1.03、2.06和4.12g/kg动物体重,分别相当于5.2、10.4和20.8g生药/kg动物体重）口服给药28周。对照组，经口给予3g赋型剂/kg动物，中、低剂量组赋型剂补足到3g赋型剂/kg，以确保各各组动物服用相同量的赋型剂（由葫芦岛帝国制药公司提供，批号。3．3 观察指标 在给药期间，进行一般综合指标观察，包括动物外观体征、行为活动和粪便性状等。每周测定1次体重和平均食物摄入率和食物利用率。死亡动物，及时进行解剖，观察推测动物死亡原因。 给药结束时，各组随机处死接近一半大白鼠(在末次给药后，禁食15 h，不禁水)，眼眶取血（每只