宋彦峰课程论文宋彦课程论文.doc

农学院 本 科 课 程 论 文 题 目： ISSR技术及其在豆类作物研究中的应用 专业班级： 农学0502班 学 号： 2005014010201 学生姓名： 宋彦峰 指导教师： 刘立峰 职 称： 研究员 二零零八年 十二月 ISSR技术及其在豆类作物研究中的应用 宋彦峰 农学0502班 2005014010201 指导教师：刘立峰摘要：（Inter-Simple sequence repeat，ISSR）是一种新型的分子标记。本文，对ISSR品种鉴定、纯度鉴定、遗传图谱构建、基因定位、亲缘关系及关键词：ISSR；分子标记；豆类；遗传多样性 ISSR technology and its application in Legume CropAbstract： Inter-Simple sequence repeat is a new kind of molecular markers. This paper introduces the principle and the characteristics of ISSR technology in brief and represents the identification of varieties, the identification of Purify, construction of genetic map, gene mapping, genetic relationship and genetic diversity of plant germplasm resources about Legumes. Key words： ISSR ; molecular marker ; Legumes ; genetic difference ，，36%—40%，2倍、鸡蛋的3倍、牛奶的12倍；18种氨基酸，8种酸含量，Food and Drug Administration(FDA)规定的高蛋白质标准还高。黑豆还含有19种油脂，不饱和酸含量达80%，吸收率高达95%以上，除能满足人体对脂肪的需要外，还有降低血液中胆固醇的作用，尤其青子叶黑大豆药效更显著。黑豆长期作为牲畜的饲料使用，而它的保健价值被人们所忽略。随着生活水平的提高，人们会更加注重身体健康也会更加注重黑豆的研究进展。 以往研究和分析豆类的品种鉴定、纯度鉴定、遗传图谱构建、基因定位、亲缘关系、同功1 ISSR分子标记及其技术原理 简单序列重复区间扩增多态性(Inter-Simple sequence repeat，ISSR)是一种新型的分子标记，是由Zietkiewicz E.等于1994年创建的一种简单序列重复区间扩增多态性分子标记。它是利用真核生物基因组中广泛存在的简单重复序列(SSR)设计引物，无需预先克隆和测序。用于ISSR-PCR扩增的引物通常为16～18个碱基序列，由1～4个碱基组成的串联重复和几个非重复的锚定碱基组成，从而保证了引物与基因组DNA中SSR的5’或3’末端结合，导致位于反向排列，间隔不太大的重复序列间的基因组阶段进行PCR扩增，而不是扩增SSR本身。ISSR是一种在PCR中直接使用微卫星序列进行DNA扩增的分子标记，具有如下特点：1）扩增基因组DNA，适用于任何富含SSR重复单元和SSR广泛分布的物种，可同时提供多位点信息和揭示不同微卫星座位个体间变异的信息2）为显性标记，符合孟德尔遗传规律3）遗传多态性高。ISSR技术采用了较长的引物，因此引物具有更强的专一性，与模板结合的强度提高，降低了杂带的干扰，随之提高了实验结果的可重复性4）无需知道任何靶标序列的SSR背景信息。用于ISSR分析的引物可基于任何在微卫星位点发现的SSR重复单元（2，3或4个核苷酸等），并且侧翼靶标简单序列重复的任何一端均能够锚定基因组序列。ISSR标记技术的原理和操作与SSR非常相似，但在引物设计上比SSR技术简单得多，又可以揭示比RFLP，SSR，RAPD等技术更高的多态性[6]。该技术现已在遗传作图、基因定位、遗传多样性、进化、系统发育等研究方面被广泛应用[7]，但在豆类研究上报道较少尤其是黑豆。文中简要介绍了近年来ISSR分子标记技术在豆类研究中的应用现状，并对其前景进行了展望。 2 ISSR技术在豆类研究中的应用 2.1遗传图谱构建和基因定位 构建遗传图谱及寻找与目标性状紧密连锁