ARTP诱变筛选匍枝根霉提高木聚糖酶活力研究..docVIP

ARTP诱变筛选匍枝根霉提高木聚糖酶活力研究 摘 要: 以TP-02匍枝根霉亚种点头根霉为出发菌株，利用ARTP诱变系统进行诱变处理，通过透明圈法进行初筛和摇瓶发酵进行复筛，获得一株遗传性状稳定的高产木聚糖酶菌株TZD-01，木聚糖酶活力达到280.81U/ml,为原始菌株的2.7倍。再用电子显微镜和扫描电镜观察诱变筛选后菌株与原始菌株微结构特征变化，ARTP诱变处理匍枝根霉可引起菌株形态特征发生改变，突变株的菌落形态不规则，颜色为黑褐色比原始菌株偏深，菌丝直径变大，形态更饱满和孢子形态规则更接近圆形，诱变筛选菌株的生长速度比原始菌株快。 关键词:ARTP；匍枝根霉；木聚糖酶；扫描电子显微镜 Abstract: To TP-02 Rhizopus stolonifer subspecies nod Rhizopus as starting strain, was mutagenized using ARTP mutagenesis system, through the transparent circle method of sieve and shake flask fermentation were rescreened, a strain of genetically stable high yield of wood of getting xylanase strain TZD-01, wood poly enzyme activity reached 280.81U/ml, was 2.7 times as high as the original strain. Mutagenesis screening st rain and original strain micro structural changes in the observed using electron microscopy and scanning electron microscopy (SEM), ARTP mutagenesis treatment induces changes in the morphology of strain characteristics of Rhizopus stolonifer, irregular morphology of colonies of the mutation, color is dark brown than the original strain darker, bacteria wire diameter becomes larger, fuller morphology and spore morphology rules closer to round, mutagenesis and screening of the strain growth rate than that of the original strain. 木聚糖是一种多聚五糖，广泛存在于植物界中，是构成植物细胞壁中半纤维素多糖的主要成分[1] 。木聚糖酶[2-3]主要由β－1,4－D－外切木糖苷酶和β－1,4－D－内切木聚糖酶构成，是能降解木聚糖为木糖和木寡糖的一组酶的总称。在微生物、动物和植物中均可获得木聚糖酶,其中木聚糖酶主要是从微生物发酵产物中提取[4] ,近年来报道曲霉、海枣曲霉、青霉、木霉、裂褶菌、芽孢杆菌等均能产生木聚糖酶[5]。在食品、生物漂白、生物制浆、饲料和处理造纸厂废水的环境污染等方面木聚糖酶应用前景广阔[6-7]。 常压室温等离子体（atmospheric and room temperature plasma，ARTP）诱变系统是由清华大学与北京思清源公司合作研发而成，利用发射粒子丰富且均匀的等离子体射流，使粒子穿过细胞膜对遗传物质发生作用，导致遗传物质的多样性损伤，由于DNA不完全修复进而形成突变株[8]；ARTP诱变系统优点有无需真空装置、产生的等离子体均匀、操作简易、射流温度低、与生物大分子和细胞作用明显、成本低等[9]，已成为微生物快速诱变的有效方法。 本实验以TP-02匍枝根霉亚种点头根霉为出发菌株，该菌株具有生长周期短，不易染菌等特点。利用ARTP技术对该匍枝根霉进行诱变处理,诱变条件为通气量10L /min、功率100W、等离子体发射源与样品之间距离为2mm，处理时间为240s。经过筛选得到一株遗传性状稳定的高产木聚糖酶菌株,确定一种匍枝根霉诱变筛选的方法，用电子显微镜和扫描电镜观察诱变筛选后菌体与原始菌株微结构特征变化。 1 材料与方法 1.1 菌株与试剂 菌株：匍枝根霉亚种点头根霉（Rhizopus　stolonifer　var．reflexus