分子荧光_2013汇总.pptVIP

五、影响荧光强度的因素 影响荧光强度的外部因素 1.溶剂的影响 除一般溶剂效应外，溶剂的极性、氢键、配位键的形成都将使化合物的荧光发生变化； 2.温度的影响 荧光强度对温度变化敏感，温度增加，外转换去活的几率增加。 3. 溶液pH 溶液的酸度（pH值）对荧光物质的影响可以分两个方面： （1）对酸碱性物质的影响（掌握）  若荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液pH值改变，物质分子和其离子间的平衡也随之发生变化，而不同形体具有其各自特定的荧光光谱和荧光效率。例如苯胺 （2） 对金属离子的影响（了解） 对于金属离子与有机试剂生成的荧光配合物，溶液pH值的改变会影响配合物的组成，从而影响它们的荧光性质。例如Ga3+离子与邻-二羟基偶氮苯，在pH3～4的溶液中形成1:1配合物，能产生荧光。而在pH6～7的溶液中，则形成1?2的配合物，不产生荧光。 4.散射光的干扰 瑞利光：光子和物质分子发生弹性碰撞，不发生能量交换，光子的运动方向发生改变，其波长与入射光相同。 散射光：由于光子与溶剂分子的相互碰撞，使光子的运动方向发生改变而向不同方向散射，称为散射光。 瑞利光的特点：强度与波长的四次方成反比，即波长越短，瑞利散射光越强。 瑞利光的消除：因瑞利散射光波长与激发光波长相同，只要选择适当的荧光测定波长或选用滤光片即可消除其影响。 拉曼光：光子和物质分子发生非弹性碰撞，光子运动方向发生的同时，光子与物质分子能量交换，使光子能量发生改变，其波长可能长于入射光，也可能短于入射光。 拉曼光特点：波长较长的拉曼光因其波长与物质的荧光波长相接近, 故对测定的干扰较大。 拉曼光的消除：由于拉曼光波长随激发光波长的改变而改变, 而荧光物质的荧光波长与激发光波长无关, 故通过选择适当的激发光波长，就可以将二者区分开。 320nm 448nm 350nm 448nm 激发320nm硫酸奎宁 激发350nm硫酸奎宁 硫酸奎宁的荧光光谱 5.溶液荧光的猝灭 荧光熄灭：指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用引起荧光其哪个度降低或荧光强度与浓度偏离线性的现象。引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂，如卤素离子、重金属离子、氧分子、硝基化合物、重氮化合物和羧基化合物等。 熄灭原因： 碰撞猝灭；氧的熄灭作用等。 （1）激发态荧光分子和熄灭剂分子碰撞，将能量转移到熄灭剂而使荧光熄灭； （2）荧光分子与熄灭剂分子作用生成了本身不发光的配合物； （3）荧光物质分子中引入重原子后，易发生系间窜越而转变为三重态； （4）当荧光物质浓度较大时，激发态分子和基态分子发生碰撞，产生荧光自熄灭现象。溶液浓度越高，自熄灭现象越严重； （5）溶液中溶解的氧分子能引起几乎所有的荧光物质产生不同程度的荧光熄灭。 荧光熄灭的原因 概念：利用荧光物质在加入某种熄灭剂后，荧光强度的减小和熄灭剂的浓度呈线性关系这一性质建立的荧光分析法，称为荧光熄灭法。 特点：荧光熄灭法比直接荧光法更灵敏、更有选择性。 应用示例：铝-桑色素配合物的荧光强度因微量氟离子的存在而引起荧光熄灭，利用这种性质可测定样品中微量氟离子的含量，这时溶液的荧光强度和氟离子浓度成反比。 荧光熄灭法 六、荧光分析方法与应用fluorescence analysis and application 1. 特点 （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？ 检测下限：0.1～0.0001?g/cm-3 相对灵敏度：0.05mol/L 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。 （2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱； （3）试样量少 缺点：应用范围小。 2.定量依据与方法 (1)定量依据 荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率? ： If = ? Ia 由朗-比耳定律： Ia = I0(1-10-? l c ) If = ? I0(1-10-? l c ) = ? I0(1-e-2.3? l c ) 浓度很低时，将括号项近似处理后： If = 2.3 ? I0 ? l c = Kc （2）定量方法 标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度； 比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较； 3.荧光分析法的应用 (1)无机