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玉林师范学院本科毕业论文(设计)开题记录表 学院生命科学与技术学院专业姓名学号→选择实验对象→选择实验仪器及相关药品→实验实施→实验数据的统计分析→得出实验结论→撰写论文 研究对象：玉林师范学院校园里的银杏 实验方案： 1.材料来源 在玉林师范学院校园内 取健康无病虫害的银杏树根、主干、及叶等部位, 采样后立即带回实验室备用。 2.培养基配方 分离真菌的培养基为马铃薯葡萄糖培养基：马铃薯 200 g; 葡萄糖 20 g; 琼脂 20 g; 水1 000 ml; pH 值自然。去皮马铃薯200 g，切成小块，加水煮沸30 min，再用4层纱布滤去残渣，滤液加水补足至1000 mL，加入20g琼脂加热溶化，再加入20 g葡萄糖溶解，分装，121℃灭菌25 min备用。 分离细菌所用培养基为牛肉膏蛋白胨培养基:琼脂 20 g ,牛肉膏 3 g ,蛋白胨 10 g ,NaCl 5g ,水1 000 mL ,p H7. 0～7. 2。 3.内生真菌的分离 　 将银杏用加有适量洗涤剂（雕牌高效清洁剂）的自来水仔细洗去表面的泥土污物，以自来水冲洗，稍晾干,带入无菌操作室后用浓度为 75 %的酒精浸泡 2～ 3 min→无菌水冲洗 3～ 5 次→浓度为0.1 %的升汞漂洗 2～ 3 min→无菌水冲洗 4～ 5 次。按无菌操作法将上述处理过的材料剪切成用剪刀剪成 1 cm 长的小块, 种植于 PDA培养基（(加四环素或氨苄青霉素 4 mg/ L))平板上, ，每板3 块，置于 28 ℃培养箱中培养 5～7 d。叶片直接剪为 0. 5 cm ×0. 5 cm 大小 ,做与根、 茎相同的处理 并进行培养。 对照试验 将表面消毒过的上述材料不做任何剪切,直接种植于3 个PDA培养基平板上, 置于 28 ℃培养箱中培养5～ 7 d, 每个样品重复 3 次, 检察是否有微生物生长。以证明表面灭菌的可靠性。 4．细菌的分离 　 将无菌处理的银杏茎、 叶、 根样品各 3 g ,每样品加 10 mL 无菌水碾碎静置 15 min 后 ,用无菌移液枪各取 70μL 涂在牛肉蛋白胨培养基上 ,37 ℃ 黑暗培养 3～5 d。 5.银杏内生真菌菌落形态观察及鉴定 　 在PDA 培养基上采用单菌丝挑取法培养出单菌落 ,记录菌落气生菌丝的疏密、 表面形态、 大小、 颜色、质地、 生长速度、 边缘形态等.采用插片培养方法 ,对分离获得的银杏内生真菌进行显微形态特征的观察、分类鉴定。 插片法 （观察基内 、外气生菌丝） 将真菌接种到平板上， 插上灭菌盖玻片后培养 ，使真菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上 ，观察时轻轻取出盖玻片， 置于显微镜下观察，进行初步确认。其次,通过制作玻片, 利用显微摄影, 对菌种的孢子、 菌丝、 孢子囊等微观形态进行观察记录。最后，比照《真菌鉴定手册》确定所分离的内生真菌的种属。 6. 银杏内生细菌菌落形态观察及鉴定 　 在牛肉膏蛋白胨培养基上, 37 ℃ 培养菌株24 h, 观察菌落形态, 并进行革兰氏染色 和芽孢染色、鞭毛染色等。 生物学特性 ：观察包括①菌落颜色、形状（圆的还是别的？）、表面是否光滑、是否湿润、是否透明、是否易挑起 ②细胞形状、革兰氏阴阳性、是否产芽孢、芽孢形状、是否α-溶血型参考 《伯杰细菌鉴定手册 》和 《常见细菌系统鉴定手册》 对菌株进行鉴定。 指 导 教 师 意 见 记录人签名： 年 月 日 说明：此表开题报告记录人填写，一式一份，由系保存。 C1103-2 玉林师范学院毕业论文(设计)中期检查表 院 专业 姓名 学号 指导教师 论文(设计) 题 目 学 生 小 结 (形状、色泽、大小等)；在细胞形态方面，将所分离的菌株进行革兰氏染色，在显微镜下观察菌体形态。然而，实验进行到“分离”这一步就遇上了“瓶颈期”，我把从校园采集到的银杏开始各项灭菌处理后，研钵中把根、茎、叶碾碎静置 15 min 后 ，依次稀释，用无菌移液枪各取10-1、 10-2 、10-3稀释度的组织液１ｍＬ