细胞培养基质量标准及检验方法.docVIP

细胞培养基质量标准及检验方法 中国医药生物技术协会 二0一一年四月 编写说明 根据中国医药生物技术协会2010年9月20日 组织召开的《动物细胞培养基生产管理及质量控制学术研讨会》纪要，结合我国的实际情况制定本标准。 本标准以《中国药典》2010版和《哺乳类动物细胞培养基》（HG/T 3935-2007）行业标准为依据，结合生物制品对细胞培养基原材料的特殊要求制定，增加了牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量等检测项目。 本标准分为细胞培养基检验项目和每个项目的检验方法两部分，为评判细胞培养基产品质量提供了依据和方法，从而规范我国细胞培养基行业健康发展。 结果评定 依据本标准和方法对细胞培养基样品进行全项检验，所有项目均符合标准要求，判定该样品为合格；若有一项不符合标准要求，则判定样品为不合格。 细胞培养基质量标准及检验方法 细胞培养基质量标准 细胞培养基质量应符合表1所示的技术要求。 表1 技术要求 检验项目 检验方法 澄清度 澄清 中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅸ B进行。 pH值（每升标示量/L） pH允许偏差范围为±0.30 中华人民共和国药典2010年版附录Ⅵ H进行。 渗透压（mOsm/kgH2O） 渗透压允许偏差范围为±5％ 中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅸ G 渗透压摩尔浓度测定法进行。 干燥减量的质量分数（%） ≤5.0 按中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅷ L 干燥失重测定法进行。 细菌内毒素（EU/ml） ≤10 按中华人民共和国药典2010年版附录Ⅺ E 细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。 微生物限度 细菌数（CFU/g） ≤200 按中华人民共和国药典2010年版附录Ⅺ J 微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。 细胞生长试验（vero细胞） 细胞形态 成纤维样贴壁生长，形态正常无变异 按中华人民共和国化工行业标准《哺乳类动物细胞培养基》HG/T 3935-2007第7.7条进行。 细胞数量 培养72h细胞数量不低于1×105cells/ml；继续维持48h细胞数量不低于1×105cells/ml 牛血清白蛋白 不得检出 依据中华人民共和国药典2010年三部附录Ⅷ I牛血清白蛋白残留量测定法进行，不得检出牛血清白蛋白。 抗生素 不得检出 依据中华人民共和国药典2010年三部附录Ⅸ A抗生素残留量测定法进行，不得检出青霉素、链霉素及庆大霉素。 检验方法 除非另有说明，检验中仅使用确认为分析纯的试剂和中华人民共和国药典2010年版中规定的纯化水。 2.1 澄清度的测定 称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水ml，搅拌至溶解。按中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅸ B进行。 .2 pH值的测定 称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水ml，搅拌至溶解按中华人民共和国药典2010年版附录进行。 .3 干燥减量的测定 按中华人民共和国药典2010年版部附录 L 干燥失重测定法进行。 .4 渗透压的测定 称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水ml，搅拌至溶解。按中华人民共和国药典2010年版部附录渗透压摩尔浓度测定法进行。 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。 .5 细菌内毒素的测定 按中华人民共和国药典2010年版附录 E 细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。 .6 微生物限度的测定 按中华人民共和国药典2010年附录微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。 .7 细胞生长试验 2.7.1.1 方法提要 本试验所用容器具及溶液均为无菌，试验操作过程均为无菌操作。 细胞在37℃恒温条件下，在含体积分数小牛血清的细胞培养液中生长h，观察细胞形态并进行细胞计数；细胞生长h后，更换不含小牛血清的细胞培养液，继续培养48h，观察细胞形态并进行细胞计数。 .7.1.2 试剂和材料 牛血清：中华人民共和国药典20年版三部附录ⅩⅢ D。 胰蛋白酶（1:250）加1 000ml平衡盐溶液，混匀、1mol/L NaOH或1mol/L HCl 调pH值7.6～7.8，过滤除菌即得。.7.1.3 仪器 医用净化工作台：洁净级别为百级 2）二氧化碳恒温培养箱：能通二氧化碳气体并且保持二氧化碳体积分数为（5±0.1）％，能在（37±1）℃恒温。 3）细胞培养瓶：T25型、无菌。 4）显微镜：倒置、相差。 5）血球计数板。 6）盖玻片：无水乙醇浸泡并擦干。 2.7.1.4 试验步骤 制备细胞悬