化学发光磁酶免疫汇总.ppt

化学发光磁酶免疫 上世纪60年代出现的放射免疫分析法是近代分析检测领域的一场革命，该法灵敏度和准确度高、特异性强，在相当长的一段时间内被广泛采用。但这种方法也存在以下一些缺点: 1.由于采用具有放射性危害的I125为示踪物，在试剂的制造、应用和操作过程中，会对人体造成严重的伤害及对环境产生难以处理的污染。 2.由于放射性同位素的危害，国家对医院开展放免分析方法作出了严格的限制和规定，制约了临床诊断医学的发展。 3.由于放射性同位素半衰期的限制，决定了放射免疫分析试剂的有效期只有1~2个月。给试剂的制造、运输、用户的使用带来极大不便。 化学发光免疫分析（Chemiluminescent immunoassay,CLIA）是在上世纪70年代末由Halmann和Velan首先提出。该法与其他免疫分析方法如放射免疫分析法、荧光免疫分析法、酶免疫分析法相比，具有特异性好、敏感性高、线性范围宽和仪器设备要求简单等优点。化学发光免疫分析法作为一种非放射性标记的检测技术，克服了放射免疫分析中放射性污染的问题，发光试剂无毒无害，对操作人员不会造成健康侵害，试剂保存周期长。 现在临床上使用较多的酶免疫分析法比较，因为酶免疫分析所使用的是显色底物，它所检测的吸光度值遵循朗伯-比尔定律，从而使检测标准曲线的线性范围较窄，灵敏度也比较低，而化学发光免疫分析法却无此限制，因此可以具备更宽的线性范围。 一、化学发光的原理 简单来讲，某些物质（发光剂）在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。 化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme 　immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。 （一）辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析 该分析系统采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶（HRP）标记抗体复合物，这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光。 1．鲁米诺及其衍生物 （二） 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析 该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。 AMPPD〔3-(2‘-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3“-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷〕 该分析系统以碱性磷酸酶标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有2-30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度达到高峰，15~ 60min内光强度保持相对稳定。 磁性生物材料以其稳定的化学性质、功能化方便、可磁性富集分离及良好的生物相容性等特性，引起了人们的广泛重视和竞相研究，并被迅速引入生命科学领域的研究中。通常磁球与双手臂偶联剂的一端结合，偶联剂的另一端结合抗体，所形成的免疫磁球可用于捕获相应的抗原，利用磁性分离器可方便地对所形成的复合物富集分离，在通过合适的检测手段来检测待测物质，现在此项技术已被应用于很多分析方法当中。 二、化学发光磁酶免疫法的优点 1、表面修饰方便， 2、生物相容性好 3、良好的顺磁性 免疫磁球表面的抗体可特异性极强地捕获相应待测物质（如细菌，抗原蛋白），这样磁性微球就变味具有生物活性的磁性材料（免疫磁球）。利用免疫磁球磁性内核的磁响应性，在外加磁场的作用下可方便地与其他杂质成分迅速分离，这样可以使分析检测过程变得简单和更易操作，因此免疫磁球是一种非常有前途的分析手段。 当免疫磁球被引入到定量分析方法中后，对分析方法的发展起了很大的推动作用。与目前常规使用的微孔板包被法相比，免疫磁球分析方法具有以下显著优点: （1）更好的选择性。 1、相对于微孔板，免疫磁球有着大的多的活性比表面积，能提供